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【6h】

观察GnRH类似物调控大鼠睾丸间质细胞annexin5、3β-HSD的表达及不同pH精子营养液对男性精子功能的影响

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第一部分GnRH类似物调控大鼠睾丸间质细胞annexin 5、3β-HSD的表达

前言

参考文献

第二部分不同pH精子营养液对男性精子功能的影响及机制

前言

参考文献

第一部分GnRH类似物对大鼠睾丸间质细annexin 5和3β-HSD表达的影响

第一章大鼠睾丸间质细胞的分离、纯化及原代培养

1材料和方法

2结果

3讨论

4参考文献

第二章GnRHa对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD表达的影响

1材料和方法

2结果

3讨论

4参考文献

第三章GnRHant对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD表达的影响

1材料和方法

2结果

3讨论

4参考文献

第二部分不同pH精子营养液对男性精子功能的影响及机制

第一章不同pH的精子营养液对男性精子各参数的影响

1材料和方法

2结果

3讨论

4参考文献

第二章不同pH精子获能液对精子各参数影响的内在机制

1材料和方法

2结果

3讨论

4参考文献

全文总结

附录：硕士研究生期间论文发表情况

致谢

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摘要

大鼠睾丸间质细胞主要分布在生精小管间的结缔组织中，约占睾丸重量的2％，但分泌的睾酮却占睾酮总量的95％。间质细胞的主要功能是合成和分泌睾酮，以调节生精作用、雄性第二性征和全身代谢。促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormones，GnRH)是由下丘脑神经元细胞体合成并由其末端直接分泌入垂体门脉系统的一种十肽化合物，同时它选择性地刺激促性腺细胞释放促性腺激素LH和FSH。GnRH类似物是人工合成的九肽激素，基于对垂体GnRH-R的作用将其分为激动剂(GnRHa)与拮抗剂(GnRHant)。人工合成的CnRHa与GnRH受体有高度的亲和力，并可抵抗内肽酶的降解而延长半衰期，产生类似于GnRH的作用；GnRHant主要是抑制促性腺激素的释放，从而抑制生物体的性腺功能，它可能是通过直接抑制GnRH受体功能而发挥上述作用的。 膜联蛋白5(annexin 5)是一种钙离子依赖的磷脂结合蛋白，其分子量大约为36kD,是膜联蛋白家族最主要的成员之一。3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)是类固醇激素合成中睾丸所独有的酶，催化睾酮合成的最后一步，它是鉴定睾丸间质细胞的重要性指标。已有研究表明，睾丸间质细胞存在GnRH受体，并且发现睾丸间质细胞也有annexin 5的存在。睾丸局部注射超生理剂量的GnRH类似物，24h后，发现睾丸内annexin 5的表达下降。生理剂量的GnRH类似物睾丸局部注射后，睾丸内armexin 5的表达升高，这些研究结果表明GnRH对睾丸中annexin 5的表达具有调节作用。 考虑到GnRH受体和annexin 5在间质细胞的存在。我们分析，GnRH类似物对annexin 5的表达可能是通过和间质细胞上GnRH受体作用，而影响到间质细胞内的annexin 5表达的。为此，我们观察了GnRH类似物对原代培养的大鼠睾丸间质细胞中annexin 5、3β-HSD表达的影响。通过原代培养大鼠睾丸间质细胞，观察不同浓度的GnRH类似物处理间质细胞后，annexin 5、3β-HSD在基因和蛋白质水平的变化。实验结果显示，经不同终浓度的GnRHa处理细胞后，annexin 5、3β-HSD的表达均升高，当GnRHa为10-5mol/L，10-6mol/L时，实验组大鼠睾丸问质细胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白质表达显著高于对照组(未加GnRHa处理)。当GnRHa为10-7mol/L时，实验组大鼠睾丸间质细胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白质表达也升高，但无统计学意义。经不同浓度的GnRHant处理细胞后，annexin 5、3β-HSD的表达均有下降，当GnRHant的终浓度为10-6mol/L，10-7mol/L时，实验组大鼠睾丸间质细胞中annexin 5、3β-HSD mRNA和蛋白质表达均显著降低，与对照组比较，具有统计学意义。 GnRH类似物对原代培养的睾丸间质细胞中annexin 5、3β-HSD表达的调节作用，可能是GnRH直接与睾丸间质细胞上的GnRH受体相结合，启动一系列信号转导通路，从而调控睾丸间质细胞annexin 5，3β-HSD表达的结果。

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