白菜耐铝基因型的筛选及耐铝相关基因克隆

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论文说明

摘要

第一章 文献综述

1．1 引言

1．2 酸性土壤中铝毒害概况

1．3 植物耐铝性研究现状和进展

1．3．1 铝在植物根系的作用位点

1．3．2 植物耐铝性机理研究

1．3．3 植物耐铝基因的克隆

1．4 分子标记的发展

1．5 cDNA-AFLP技术及其应用

1．5．1 cDNA-AFLP技术的创建

1．5．2 cDNA-AFLP技术的原理

1．5．3 cDNA-AFLP的技术特点及优势

1．5．4 cDNA-AFLP技术的应用方向及领域

1．6 反式Northern blot技术

1．6．1 反式Northern blot技术概述

1．6．2 反式Northern blot技术的基本流程

1．6．3 反式Northern blot的技术优势

1．7 RACE技术及其研究应用

1．7．1 RACE技术的原理及方法

1．7．2 传统RACE的优化技术

1．7．3 RACE技术的研究领域

1．8 研究的目的、意义及试验设计

第二章 白菜耐铝基因型的筛选

2．1 试验材料

2．1．1 试验材料

2．1．2 日本园式培养液的配制

2．2 试验方法

2．2．1 自交系种子的日本园式培养和根指标的测定

2．2．2 苏木精染色

2．3 结果与分析

2．3．1 五种白菜自交系根净增长度和相对伸长率测定

2．3．2 五种白菜自交系根尖苏木精染色结果

2．4 讨论

第三章 白菜耐铝相关基因的cDNA-AFLP分析

3．1 试验材料

3．1．1 材料来源及生长环境

3．1．2 主要试验设备

3．1．3 主要试剂

3．2 试验方法

3．2．1 白菜根尖总RNA的提取与检测

3．2．2 RNA反转录合成sscDNA

3．2．3 dscDNA的合成

3．2．4 dscDNA的酶切和接头连接

3．2．5 cDNA-AFLP的预扩增反应

3．2．6 选择性模板的制备和选择性扩增反应

3．2．7 产物的聚丙烯酰胺变性凝胶电泳分析

3．2．8 差异片段的回收和PCR重扩增

3．2．9 重扩产物的回收纯化及反Northern blot验证

3．2．10 阳性差异片段的测序及序列同源性搜索比对

3．3 结果与分析

3．3．1 白菜根尖总RNA的完整性及纯度检测

3．3．2 dscDNA的琼脂糖凝胶电泳分析

3．3．3 双酶切及连接产物的琼脂糖凝胶电泳分析

3．3．4 cDNA-AFLP的预扩增产物检测

3．3．5 不同铝胁迫时期白菜基因表达差异分析

3．3．6 TDFs回收重扩产物的纯化及反Northern验证

3．3．7 TDFs测序及BLAST序列同源性比对

3．4 结论与讨论

3．4．1 cDNA-AFLP技术适用性探讨及注意事项

3．4．2 白菜耐铝相关基因的功能探讨

第四章 RACE法构建A-A10T8 cDNA全长及克隆分析

4．1 试验材料

4．1．1 材料和试剂

4．1．2 RACE技术相关引物

4．2 试验方法

4．2．1 RACE特异性引物的设计

4．2．2 RACE技术中sscDNA的合成

4．2．3 RACE技术的巢式PCR扩增

4．2．4 PCR扩增产物的测序及分析

4．3 结果与分析

4．3．1 A-A10T8 cDNA 3’末端电泳检测及序列获得

4．3．2 A-A10T8 cDNA 5’末端电泳检测及序列获得

4．3．3 A-A10T8 cDNA全长序列的获得

4．3．4 A-A10T8全长序列的生物信息学分析

4．4 结论和讨论

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

附录一 cDNA-AFLP所用引物和接头序列

附录二 缩略词(Abbreviation)

致谢