B7-H3调节髓源性抑制细胞凋亡促进小鼠前列腺癌进展的实验研究

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目的：本课题利用自行构建的B7-H3高表达的小鼠前列腺癌RM-1（RM-1-B7-H3）及对照细胞株（RM-1-mock），通过体内、体外实验分析B7-H3在小鼠前列腺癌进展中的免疫作用机制。
　　方法：检索小鼠B7H3的核苷酸序列，合成小鼠B7H3基因片段，转入目的载体，利用Gateway Technology构建B7H3基因高表达的质粒载体，脂质体转染获得稳定RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock为对照细胞。应用荧光显微镜下观察转染绿色荧光蛋白表达、RT-PCR检测mRNA表达的变化以及流式细胞仪技术检测分析，鉴定RM-1-B7-H3转基因细胞的效率及稳定性。在此基础上，体外实验比较分析RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞增值能力；自C57BL/6小鼠皮下接种RM-1-B7-H3转基因细胞以及 RM-1-mock细胞，观察体内成瘤情况；分离不同实验组荷瘤小鼠肿瘤组织及脾脏组织，流式分析技术检测各组间 Gr-1+CD11b+MDSC表达水平，并以PI评估MDSC凋亡情况；离体实验中，自健康C57BL/6小鼠脾脏分离纯化Gr-1+CD11b+MDSC，并分别与RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞混合培养，以PI表达情况分析B7-H3对MDSC凋亡的影响；为进一步确认B7-H3对MDSC的凋亡作用，本论文同时采用siRNA技术干预髓源性细胞株THP-1上B7-H3表达构建THP-1B7-H3low细胞以及THP-1-NC组，体外实验分析B7-H3缺失对髓源性细胞凋亡的影响。此外，本论文还在利用环磷酰胺抑制C57BL/6骨髓增殖的基础上，再次皮下移植接种RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞，观察肿瘤生长情况，分析B7-H3发挥促瘤作用是否依赖于髓源性细胞。
　　结果：成功构建稳定表达、高效表达 B7-H3的 RM-1转基因细胞。体外实验RM-1-B7-H3转基因细胞以及RM-1-mock细胞在增殖能力方面两者并无统计学差异；然而，体内实验发现RM-1-B7-H3转基因细胞肿瘤生长显著高于RM-1-mock细胞。进一步研究发现，荷瘤 RM-1-B7-H3的 C57BL/6小鼠肿瘤组织及脾脏组织中Gr-1+CD11b+MDSC细胞数量显著高于RM-1-mock荷瘤小鼠；同时，本论文还发现RM-1-B7-H3荷瘤小鼠体内MDSC凋亡率显著低于RM-1-mock荷瘤小鼠。体外实验也证实RM-1-B7-H3细胞株与RM-1-mock细胞株相比，脾脏Gr-1+CD11b+MDSC凋亡率显著下降；人髓源性细胞株 THP-1-B7-H3low体外凋亡水平显著高于THP-1-B7-H3high；上述结果提示B7-H3在抑制MDSC凋亡中发挥了重要作用。此外，环磷酰胺抑制骨髓造血后再次移植接种RM-1-B7-H3细胞株与RM-1-mock细胞株，构建前列腺癌荷瘤小鼠模型，两者之间的肿瘤生长差异并不存在，提示 B7-H3促进前列腺癌生长依赖于髓源性细胞。
　　结论:众多研究均证实B7-H3高表达与前列腺癌进展密切相关，然而其中的作用机制并不清楚。本论文利用转基因技术构建B7-H3差异表达的RM-1细胞株，体内实验证实B7-H3可以促进小鼠前列腺癌细胞成瘤，其机制可能是B7-H3抑制髓源性抑制细胞凋亡，并通过聚集髓源性抑制细胞促进前列腺癌进展。

著录项

作者
周云峰;
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作者单位

苏州大学;

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授予单位苏州大学;
学科泌尿外科学
授予学位博士
导师姓名侯建全;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类前列腺肿瘤;
关键词
B7H3核苷酸序列; 前列腺癌; 免疫作用机制; 髓源性细胞;

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