Cd2抗体与抗原结合的特性及介导的效应研究

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CD28分子的基因定位于人2号染色体q33-34区，由1120核苷酸组成，表达于大多数静止及活化的T细胞，约95％CD4+T和50％CD8+T细胞表达该分子。此外，部分NK细胞和人恶性浆细胞也表达CD28分子。B7-1(CD80)和B7-2(CD86)是CD28的天然配体，CD28分子与表达在抗原呈递细胞表面的相应配体B7-1和B7-2结合，从而产生T细胞应答所需的协同刺激信号。B7-CD28信号并非仅局限性地产生于抗原呈递细胞与T细胞之间，已在某些肿瘤细胞如多发性骨髓瘤细胞，白血病细胞等也发现异常的B7-CD28信号通路，且该通路可能参与肿瘤的恶性增殖与转移。通过特异性抗体封闭CD28分子，有可能对肿瘤细胞的生长发挥抑制作用。本研究旨在运用自行制备的CD28抗体，以转染人CD28基因的小鼠T淋巴瘤细胞株及天然表达CD28分子的人白血病细胞株Jurkat为研究对象，在体外分析抗体对上述细胞生长与增殖影响的基础上，通过建立肿瘤模型，探讨抗体对肿瘤细胞的成瘤及肿瘤消长的影响，以期寻找具有抗瘤作用的生物制剂。
　　第一部分鼠抗人CD28分子单克隆抗体的制备及鉴定
　　目的：制备鼠抗人CD28分子单克隆抗体并鉴定其生物学功能。
　　方法：采用本室建立的腹水诱生法制备单抗并经Protein G亲和层析分离纯化。间接免疫荧光法分析单克隆抗体效价；FCM分析单克隆抗体识别的抗原位点；FCM分析单克隆抗体对不同细胞株人多发性骨髓瘤细胞(U266)、小鼠淋巴瘤细胞转入CD28基因细胞株(CD28-T)和人白血病细胞株(Jurkat)膜型CD28分子的识别。
　　结果：腹水形成率为90％以上，收获量为5ml/只以上。腹水中抗体蛋白的得率达3mg/ml。纯化抗体用于间接免疫荧光检测的用量为0.5μg/5×105。竞争抑制试验表明该单抗能完全阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合，提示其识别的抗原表位与对照抗体相同或相似。FCM分析表明，CD28 mAb能良好地识别多种细胞表面膜型CD28分子。
　　结论：制备了鼠抗人CD28分子mAb(命名为SQA-11)，为探讨CD28信号转导在肿瘤生长与转移过程中的作用及机制奠定了物质基础。
　　第二部分 SQA-11与肿瘤细胞膜型CD28结合后介导的效应研究
　　目的：探讨SQA-11体内、外对CD28+肿瘤细胞的生长与增殖的影响作用，以期寻找具有抗瘤作用的生物制剂。
　　方法：MTT法体外分析SQA-11对CD28-T和Jurkat生长和增殖的影响；建立CD28-T与Jurkat细胞的Balb/c裸鼠的肿瘤模型，FCM分析成瘤小鼠瘤体细胞CD28分子的表达；将CD28-T与Jurkat分别经SQA-11预处理后再行建立肿瘤模型，观察成瘤时间和成瘤率，同时与未经抗体处理组进行比较。将肿瘤模型随机分组，采用瘤内注射法将SQA-11分2-3点、隔日一次共4次注入瘤内，抗体用量为50μg/mm3观察肿瘤的消长及荷瘤鼠的生存状态。
　　结果：MTT检测发现SQA-11能够明显抑制CD28-T和Jurkat细胞的体外增殖。CD28-T细胞于接种第3天即形成肉眼可见的肿瘤结节，且成瘤率为100％(40/40)。Jurkat细胞于接种第14天后陆续形成肉眼可见的肿瘤结节，成瘤率为80％(32/40)。对接种第40天的肿瘤结节中的细胞经FCM进行分析，CD28的阳性率分别为CD28-T90.4％、Jurkat74.3％。与未接种前体外培养的细胞无明显差异。CD28-T与Jurkat细胞分别经SQA-11共孵育后接种小鼠，CD28-T的成瘤时间推迟2天即第5天形成肉眼可见的肿瘤结节，成瘤率仍为100％(20/20)；Jurkat细胞的成瘤时间推迟5天即第19天开始形成肿瘤结节，成瘤率为50％(10/20)。将CD28-T(第7天)及Jurkat(第30天)肿瘤模型用SQA-11瘤内注射，观察40天。Jurkat模型组部分(3/10)裸鼠的肿瘤结节变小，平均体积由注射时的56mm3减为32mm3；对CD28-T模型组肿瘤结节的生长无抑制作用。
　　结论：SQA-11对天然表达CD28分子的人肿瘤具有一定的抑制作用；而对表达外源CD28分子的小鼠肿瘤无明显影响。

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作者
仇俊兰;
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作者单位

苏州大学;

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授予单位苏州大学;
学科免疫学
授予学位硕士
导师姓名邱玉华;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肿瘤病理学、病因学;免疫生物学;
关键词
协同刺激信号; 动物模型; 单克隆抗体; 肿瘤消长; 生物制剂; 抗瘤作用;

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