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全细胞FISH技术在水华预警中应用及三种淡水丝状蓝藻水体去污效果初步研究

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第一章 文献综述

一、蓝藻及蓝藻水华

二、荧光原位杂交(FISH)

(一)荧光原位杂交基本步骤

(二)荧光原位杂交技术的局限性

(三)荧光原位杂交技术的应用

第二章 FISH技术在铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)研究中的应用

一、铜绿微囊藻(M.aeruginosa)核糖体RNA 16S-23S rRNA转录间隔区(ITS)序列测定

1.微囊藻的培养与分离纯化

2.引物的设计与合成

3.铜绿微囊藻基因组DNA的提取

4.PCR基因扩增

5.PCR产物的纯化

6.感受态细胞的制备与转化

7.PCR产物测序

二、全细胞荧光原位杂交(whole-cell fluorescence in situ hybridization)技术在铜绿微囊藻(M.aeruginosa)研究中的应用

1.材料与方法

2.探针设计

3.杂交实验

三、讨论

第三章 三种淡水丝状蓝藻与铜绿微囊藻混养实验

一、材料与方法

1.实验材料

2.实验方法

二、结果与分析

三、讨论

参考文献

攻读硕士期间发表论文情况

致谢

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摘要

本课题将全细胞荧光原位杂交技术应用于水华微藻的主要藻种之一铜绿微囊藻的研究上,根据铜绿微囊藻ITS序列通过Oligo软件设计探针,并对其5’端进行FITC荧光标记。杂交反应后,通过荧光显微镜观察到铜绿微囊藻藻细胞发出绿色荧光,分别用三种淡水丝状蓝藻与一种大型海洋绿藻作对照,在荧光显微镜下未观察到绿色荧光。实验结果表明,本实验设计的探针对铜绿微囊藻具有高度的特异性,能够对自然水体中的铜绿微囊藻进行定性定量分析,这将对水体中微藻水华的暴发起到预警预报作用。同时,课题还进行了三种淡水丝状蓝藻与铜绿微囊藻混养研究,通过检测藻体生长量的变化以及培养基中主要营养盐N、P含量的变化,来研究它们之间是否存在相互影响。结果表明,通过丝状藻与铜绿微囊藻混养,微囊藻的生长明显受到抑制,混养组中丝状蓝藻生长量高于单养组,培养基pH值升高。

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