体外建立血脑屏障细胞模型及其屏障功能的建立

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目的:建立简便、易行的能够模拟在体血脑屏障的体外细胞模型.鉴定模型的屏障功能,为今后体外研究相关疾病提供一个工具.方法:①以SD大鼠为实验材料,采用两步滤过法获得微血管段,胶原酶消化,低分子右旋糖苷密度离心获得脑微血管内皮细胞,接种4小时换液使获得的细胞纯化.倒置显微镜下观察细胞的形态,细胞Ⅷ因子相关抗原(ⅧF-Ag)免疫组化法鉴定细胞及其纯度,通过碱性磷酸酶（ATP）的表达来分析内皮细胞被微动脉和微静脉污染的程度，通过测定内皮细胞分泌ET-1量，鉴定培养的内皮细胞活力②采用振荡法分离纯化1型星形胶质细胞，GFAP抗体免疫组化法鉴定细胞及纯度.③将传至第2代的大鼠胶质细胞接种于涂有鼠胶原的Transwell多聚酯膜底侧，培养4小时后将Transwell倒转放入正常位置，加培养液继续培养7天，待细胞贴壁牢固.将传至第2代的脑微血管内皮细胞接种于Transwell内侧，用与培养胶质细胞相同的培养液，细胞共同培养一周.HE染色观察细胞在多聚酯膜上的生长情况.检测共培养以后血脑屏障特异性酶γ-GT含量;测量内皮细胞吞饮FITC-右旋糖苷（FITC-Dextran、分子量4kDa）量;测定经BMEC细胞间隙进入BBB的荧光素钠（FLU，分子量376Da）的通透性，通透性用通透系数表示，记录不同时间点（0.5h、1h、2h、4h）<'125>I-BSA(分子量66kDa）的通透量④研究人脐静脉内皮细胞与1型星形胶质细胞共培养模型的荧光素钠、<'125>I-BSA通透量.结论：①我们实验采用的两步滤过获得脑微血管段，胶原酶消化，低分子量右旋糖苷密度离心可分离和培养大鼠脑微血管内皮细胞.这一方法较其他方法程序简单，获得细胞纯度高，适合用于体外BBB模型的建立.②通过脑微血管内皮细胞与1型星形胶质细胞共培养能够形成与在体血脑屏障类似的结构，并具有在体屏障的限制物质通透、酶屏障的功能.但在细胞吞饮方面与在体BBB有差异.这方面的研究结果在国内还未见有报道.这一模型适合用于BBB物质转运和BBB细胞功能特性方面的研究.③人脐血管内皮细胞与1型星形胶质细胞共培养也表现出一定的屏障功能.这一模型可用于物质通透性的研究.

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作者
鲍欢;
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作者单位

苏州大学;

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授予单位苏州大学;
学科神经病学
授予学位硕士
导师姓名包仕尧;
年度 2003
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类脑血管疾病;
关键词
血脑屏障; 脑微血管内皮细胞; 酶屏障; 细胞内饮; 通透性;

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