论文说明
摘要
第1章文献综述
1．1长江三角洲白山羊地域分布以及品种特性
1．2笔料毛分类及优质笔料毛特点
1．3毛囊结构及其功能
1．4毛囊发生及周期-I生循环
1．5分离纯化毛囊干细胞的方法
1．6 CMTM3
1．7雄性激素
1．8本课题研究的目的意义
第2章长江三角洲白山羊毛囊干细胞的分离纯化
2．1 引言
2．2材料与方法
2．2．1 实验材料
2．2．2主要试验仪器
2．2．3主要试验试剂
2．3长江三角洲白山羊毛囊干细胞的原代培养
2．3．2组织块法分离培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞
2．3．3长江三角洲白山羊毛囊干细胞的第一次代培养
2．4细胞形态、毛囊干细胞标志物的检测以及流式细胞纯化
2．4．1细胞的H．E染色
2．4．2荧光检测毛囊干细胞标志物
2．4．3毛囊干细胞标志物CD49F、CD34流式检测(未破膜)
2．4．4毛囊干细胞标志物CD34流式检测(破膜)
2．4．5流式细胞分选CD49F阳性毛囊干细胞
2．5毛囊干细胞活力、克隆形成率、复苏存活率检测
2．5．1细胞活力检测
2．5．2细胞克隆形成率的测定
2．5．3细胞复苏存活率测定
2．6结果与分析
2．6．2细胞的H．E染色
2．6．3免疫荧光检测毛囊干细胞标志物
2．6．4毛囊干细胞标志物CD49F、CD34流式检测(未破膜)
2．6．5毛囊干细胞标志物CD34流式检测(破膜)
2．6．7毛囊干细胞活力、克隆形成率、复苏存活率检测
2．7讨论
2．7．1分离毛囊干细胞的方法
2．7．2毛囊干细胞标志物
2．8研究结论
第3章CMTM3基因在长江三角洲白山羊毛囊干细胞中的表达及功能验证
3．1前言
3．2材料与方法
3．2．1主要试验仪器
3．2．2主要试验试剂
3．2．3长江三角洲白山羊毛囊干细胞总RNA的提取和检测
3．2．4 RNA反转录及cDNA验证
3．2．5引物的设计
3．2．6 Real-Time PCR
3．3基因合成以及载体构建
3．3．1基因合成
3．3．2 CMTM3过表达腺病毒载体构建
3．3．3 CMTM3干扰腺病毒载体构建
3．3．4质粒扩增
3．3．5腺病毒包装
3．3．6腺病毒扩增与纯化
3．3．7荧光稀释法测定病毒滴度
3．4 WB检测相关蛋白的表达情况
3．4．1蛋白样本提取制备
3．4．2 Western Blot检测
3．5 CCK-8法检测细胞增殖
3．5．1细胞增殖检测
3．5．2活力计算
3．6 PI染色检测细胞周期
3．7 AnnexinV／PI双染色法检测细胞凋亡
3．8皮肤组织中AR、EGF、VEGFA、IGF-1水平的测定
3．9含雄激素培养基的配置方法
3．10数据处理
3．11实验结果
3．11．1长江三角洲白山羊毛囊干细胞总RNA提取
3．11．2基因合成以及载体构建
3．11．3基因表达及鉴定
3．11．4 RT-qPCR检测腺病毒载体感染后相关基因的表达
3．11．5 WB检测相关蛋白的表达情况
3．11．6 CCK-8法检测细胞增殖
3．11．7细胞周期检测
3．11．8细胞凋亡检测
3．11．9皮肤组织中AR、EGF、VEGFA、IGF-1检测结果
3．12讨论
3．12．1 CMTM3基因的表达水平对毛囊干细胞的影响
3．12．2雄激素对毛囊干细胞的影响
3．12．3生长因子与MAPK信号通路
3．13研究结论
全文结论
创新点
研究展望
参考文献
插图索引
表格索引
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
声明
