致猪腹泻病毒快速检测方法研究及分子流行病学调查

摘要

符号说明

计量单位

文献综述

1 病原学特征

2 流行情况

3 病毒的基因组结构与蛋白质功能

3．1 PEDV基因组结构

3．2 病毒结构蛋白功能

3．3 病毒非结构蛋白功能

4 猪流行性腹泻病毒诊断方法研究进展

4．1 RT-PCR法

4．2 ELISA法

4．3 免疫荧光法

4．4 电镜法

4．5 免疫组化技术

4．6 血凝试验

4．7 逆转录环介导等温扩增技术

4．8 胶体金检测方法

5 PEDV的免疫及预防措施

5．2 弱毒疫苗

5．3 基因工程疫苗

6 研究目的及意义

研究内容一 致猪腹泻病毒PCR检测方法的建立

1 材料

1．2 主要试剂和生物材料

1．3 主要仪器

2 实验方法

2．1 引物设计

2．2 处理样品

2．3 提取病料中RNA

2．4 RNA反转录

2．5 PCR条件优化

2．6 特异性实验

2．7 PCR反应条件的优化及反应体系的确定

3 结果

4 讨论

研究内容二 猪流行性腹泻病毒胶体金检测方法的优化

1．2 实验试剂、材料、仪器

1．3 主要溶液配制

2 方法

2．1 腹水的制备

2．2 胶体金的制备

2．3 胶体金试纸条的优化摸索

3 结果

3．1 优化前后试纸条灵敏度检测结果对比

3．2 标记抗体浓度摸索结果

3．4 优化对比结果

3．6 临床样品检测结果

4 讨论

研究内容三 猪流行性腹泻病毒PLA检测方法的初步建立

1 材料

1．1 抗体和检测样品来源

1．2 实验试剂和仪器

2 方法

2．1 抗体结合生物素B

2．2 强制探针结合试验(Force test)

2．3 PLA检测猪流行性腹泻病毒实验

3 结果

3．1 强制探针结合实验结果

3．2 PLA方法初步建立结果

4讨 论

研究内容四 致猪腹泻病毒的流行病学调查

1 材料

1．1 临床样品信息

1．2 材料及仪器

2 实验方法

2．1 引物设计

2．2 目的片段胶回收

2．3 目的片段连接

2．4 连接产物转化

2．5 提取质粒DNA

2．6质粒DNA酶切鉴定

2．7 鉴定后的质粒测序

3 结果

3．2 PEDVM、S1片段PCR扩增图

3．2 猪流行性腹泻病毒目的基因序列分析

4 讨论

全文结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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