同时检测和区分猪瘟野毒株和兔化弱毒疫苗株及牛病毒性腹泻病毒1型的三重荧光定量RT-PCR方法的建立

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第一章引言

1.1瘟病毒概述

1.1.1猪瘟及猪瘟病毒概述

1.1.2猪瘟兔化弱毒疫苗概述

1.1.3 BVDV概述

1.1.4瘟病毒基因组结构及其功能

1.1.5瘟病毒基因组编码的蛋白及其功能

1.1.6猪瘟病毒的遗传分型

1.1.7 BVDV的遗传分型

1.2瘟病毒的诊断方法和研究现状

1.2.1病毒的分离与鉴定

1.2.2血清学诊断

1.2.3免疫学诊断

1.2.4分子生物学诊断技术

1.2.5鉴别检测技术

1.3荧光定量PCR

1.3.1荧光定量PCR原理

1.3.2荧光定量PCR的定量形式

1.3.3荧光定量PCR的分类

1.3.4多重荧光定量PCR及其在病毒研究上的应用

1.4本研究的目的和意义

第二章同时检测和区分猪瘟野毒株和兔化弱毒疫苗株及牛病毒性腹泻病毒1型的三重荧光定量RT-PCR方法的建立

2.1材料和方法

2.1.1病毒

2.1.2主要实验仪器及试剂

2.1.3引物和探针

2.1.4病毒RNA的提取和反转录

2.1.5三重荧光定量RT-PCR阳性标准品的制备

2.1.6三重荧光定量RT-PCR反应条件的优化

2.1.7特异性试验

2.1.8敏感性试验

2.1.9重复性试验

2.1.10三重荧光定量RT-PCR与其它方法的符合率试验

2.1.11病毒分离的验证

2.1.12三重重荧光定量RT-PCR对现地样品的检测和种系发生分析

2.2结果

2.2.1三重荧光定量RT-PCR标准曲线的建立

2.2.2三重荧光定量RT-PCR的特异性

2.2.3三重荧光定量RT-PCR的敏感性

2.2.4三重荧光定量RT-PCR的重复性

2.2.5病毒分离的验证结果

2.2.6三重荧光定量RT-PCR与其它方法的符合率

2.2.7种系发生分析

2.3讨论

第三章总结

参考文献

致谢

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