穿山龙薯蓣皂苷酶反应的研究

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本论文主要研究穿山龙薯蓣总皂苷的提取方法,对微生物sp.s00c菌所产的穿山龙薯蓣皂苷酶进行分离纯化,并对此纯化酶性质进行研究。用此酶水解穿山龙薯蓣总皂苷,得到穿山龙薯蓣皂苷酶解产物,将酶解产物进行分离提纯并进行纯度检测。
　　采用乙醇提取法提取皂苷,从1 kg中草药穿山龙饮片中提取穿山龙薯蓣总皂苷33.13 g,得率为3.31％。经薄层层析检测知其主要成分为3-O-｛a-L-鼠李糖基-(1→4)-[a-L-鼠李糖基-(1→2)-]｝-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蓣皂苷元。
　　为得到高产穿山龙薯蓣皂苷酶的菌,从三种微生物菌中筛选出微生物sp.s00c菌作为研究对象。该菌所产的酶能水解穿山龙薯蓣皂苷的3位碳糖基,制备出低糖基皂苷。筛选出穿山龙为最佳诱导剂,诱导剂浓度为15％,最佳发酵时间为5d。粗酶液经硫酸铵沉淀、透析后经DEAE-Cellulose DE52阴离子交换柱梯度洗脱得到纯化酶。利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对其进行纯度检测及蛋白分子量测定,测得其分子量为59kDa。薯蓣皂苷酶的性质为:最适酶反应温度为40℃,最适pH值为5.0,酶温度稳定的范围为20℃～50℃,酶的pH值稳定范围为5.0～6.0,米氏方程为1/[V]=2102/S+43.87,最大反应速度Vmax=2.29x10-2μmol/h,米氏常数Km=48.18mol/L。该酶可以水解柴胡皂苷,不能水解朱砂根皂苷和白头翁皂苷。该薯蓣皂苷酶可以水解主要含3-O-｛a-L-鼠李糖基-(1→2)-[B-D-葡萄糖基-(1→3)-]｝-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蓣皂苷元的薯蓣皂苷底物,使之形成单糖基薯蓣皂苷元。薯蓣皂苷酶的酶解条件为:最佳反应时间24h,最佳底物浓度1.0％,酶反应最佳温度为40℃,最佳pH值为5.0。
　　以穿山龙薯蓣总皂苷为底物进行酶反应,酶解产物经硅胶柱层析分离得到3-O-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蓣皂苷元单体(酶解产物Ⅰ)3.57 g,得率为17.85％,高效液相色谱检测其纯度为69.41％。同时,也从酶解产物中得到了一个未知的副产物,即产物Ⅱ1.64 g。

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作者
刘冰;
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作者单位

大连工业大学;

大连轻工业学院;

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授予单位大连工业大学;大连轻工业学院;
学科发酵工程
授予学位硕士
导师姓名金凤燮;
年度 2006
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类有效成分的分离与提取;
关键词
穿山龙; 薯蓣皂苷酶; 酶性质; 高效液相色谱; 酶解产物; 乙醇提取法;

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