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通过线粒体12S-16S rDNA、D-loop、COI对不同地区绒螯蟹进行PCR-RFLP分析

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前言

论文文说明:资助

第一章绒螯蟹种质资源研究现状

第二章不同地区绒螯蟹线粒体12S-16S RDNA PCR-RFLP分析

1材料与方法

1.1材料来源

1.2主要试剂和仪器设备

1.3总体DNA提取

1.4引物序列与PCR反应

1.5线粒体12S-16S rDNA限制性内切酶消化

1.6限制性内切酶分析

2结果

2.1样品的总体DNA提取及电泳检测

2.2线粒体12S-16S rDNA的PCR扩增

2.3限制性酶切分析

3讨论

3.1绒螯蟹的分子鉴定标记

3.2酶切片段超长性

第三章不同地区绒螯蟹线粒体D-LOOP控制区PCR-RFLP分析

1材料与方法

1.1材料来源

1.2主要仪器设备

1.3总体DNA提取

1.4引物序列与PCR反应

1.5线粒体D-loop控制区限制性内切酶消化

1.6酶切产物电泳检测

1.7数据处理和分析

1.8系统树的构建

2结果

2.1样品的总体DNA提取及电泳检测

2.2线粒体d-loop控制区的PCR扩增

2.3限制性酶切分析

3讨论

3.1绒螯蟹的分子鉴定标记:

3.2酶切片段超长性

3.3长江、瓯江水系种群混杂情况

3.4绒螯蟹的遗传多样性

3.5绒螯蟹群体的亲缘关系

第四章不同地区绒螯蟹线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ(COI)的PCR-RFLP分析

1材料与方法

1.1材料来源

1.2主要仪器设备

1.3总体DNA提取

1.4引物序列与PCR反应

1.5线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COI)限制性内切酶消化

1.6酶切产物电泳检测

1.7数据处理和分析

1.8系统树的构建

1.9酶切产物电泳检测

2结果

2.1样品的总体DNA提取及电泳检测

2.2线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COI)的PCR扩增

2.3限制性酶切分析

3讨论

3.1绒螯蟹的分子鉴定标记:

3.2酶切片段超长性

3.3长江、瓯江水系种群混杂情况

3.4绒螯蟹的遗传多样性

3.5绒螯蟹群体的亲缘关系

结论

参考文献

附页1:线粒体12S-16S RDNA的酶切图片

附页2:线粒体D-LOOP的酶切图片

附页3:不同地区线粒体D-LOOP个体样本被HINFI、RSAI和ECORV酶切图片

附页4:DNA池的线粒体COI的酶切图片

附页5:不同地区线粒体COI个体样本被HAEIII和MSPI酶切图片

致 谢

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摘要

利用PCR-RFLP技术,分别对中国大陆不同地区的绒螯蟹和1个俄罗斯地区的绒螯蟹的线粒体12S-16S rDNA、D-loop控制区和细胞色素酶亚基Ⅰ(COI)进行了多态性分析。对绒螯蟹的分类和遗传多样性进行了初步的探讨。主要结果如下:1.通过对中国大陆10个地区的绒螯蟹和1个俄罗斯地区的绒螯蟹的线粒体12S-16S rDNA约1 700bp的片段进行了扩增,应用1 2种限制性内切酶对该PCR产物进行了RFLP分析。在应用的12种内切酶中有切点的有6种:DraⅠ,HindⅢ,HaeⅢ,TaqⅠ,HinfⅠ和Rsa Ⅰ。¨个地区的绒螯蟹线粒体12S-16S rDNA经RFLP分析,共得到4种限制性酶切类型。2.通过对中国大陆12个地区的绒螯蟹和1个俄罗斯地区的绒螯蟹的线粒体D-loop控制区约700bp片段的扩增,应用13种内切酶对该PCR产物进行了RFLP分析。3.通过对中国大陆11个地区的绒螯蟹和1个俄罗斯地区的绒螯蟹的线粒体的细胞色素 氧化酶Ⅰ(COI)约700bp片段的扩增,选择性的应用5种内切酶对该PCR产物进行了 RFLP分析。

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