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快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金免疫层析方法的建立

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磺胺二甲基嘧啶(Sulfadimidine,SM2)属磺胺类药物,是一种重要的广谱抑菌剂,常被用于预防和控制畜禽疾病。磺胺二甲基嘧啶及其代谢产物容易在动物肌肉组织、脏器或其他可食性部分(如蛋、乳等)中蓄积,通过食物链进入人体,给人类健康带来极大的危害。因此,加强兽药残留的监控和检测,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。本研究基于竞争抑制免疫层析原理,旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金免疫层析方法。
　　 通过应用胶体金免疫层析技术,将抗SM2单克隆抗体标记到胶体金颗粒上,制备金标抗体；同时将制备的人工抗原SM2-BSA包被在NC膜上,作为检测线；将驴抗鼠二抗包被在NC膜上,作为质控线。通过对SM2胶体金免疫层析试纸条各项参数进行优化,确定最终工艺条件,成功建立快速检测SM2残留的胶体金免疫层析法,并研制出SM2胶体金试纸条。SM2胶体金试纸条的生产工艺参数如下:胶体金颗粒大小为40 nm,抗体标记量为1.0μg／mL,标记pH为7.0,抗原浓度为0.5 mg／mL,驴抗鼠二抗浓度为1.0 mg／mL。参照以上生产工艺参数,制备的SM2胶体金试纸条的检测灵敏度可达10 ng／mL,检测时间为5 min,检测范围为0～10000 ng／mL,且与磺胺甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑及磺胺吡啶等8种磺胺类药物的交叉反应率较小。通过60℃加速保存实验,预计该试纸条保质期为18个月。
　　 以猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜为实际样本进行SM2的加标回收实验,以乙腈为提取剂,用磷酸缓冲液稀释一定倍数后可消除基质影响,且在9种样品基质中的最低检出限均低于我国的限量标准(100μg／kg)。
　　 本研究成功建立了磺胺二甲基嘧啶残留检测的胶体金免疫层析方法,并研制出SM2胶体金快速检测试纸条。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测时间短、成本低廉等优点,可适用于动物源性食品(如猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜等)中磺胺二甲基嘧啶残留的现场大批量快速检测。

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