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植绥螨系统关系及巴氏新小绥螨不同群体分析

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摘要

本论文基于ITS基因序列对植绥螨科17种植绥螨类群的系统发育关系进行了探讨,并使用ISSR分子标记对巴氏新小绥螨的居群遗传多样性进行评估,分析和探讨了其居群遗传结构和种群差异。主要研究内容和结果有以下两个方面:
   1、植绥螨的分子系统发育分析
   本文通过对17种植绥螨ITS基因序列(包括实验所测得四种植绥螨ITS基因序列及从Genbank中所获得的13种植绥螨ITS序列)的比对分析,探讨其属间,种间的系统发育关系。
   实验所测四种植绥螨ITS片段A+T平均含量为57.63%,、G+C平均含量42.38%。在ITS1,5.8S与ITS2三个区段中,ITS1区段含有变异位点117个,简约信息位点20个。ITS2区段包含变异位点16个,简约信息位点2个。5.8S区段的变异位点和简约信息位点则较少分别为8个和1个。17种植绥螨的ITS片段A+T平均含量为57.5%,G+C平均含量为42.5%。ITS1区段含有变异位点214个,简约信息位点137个。ITS2区段则包含变异位点44个,简约信息位点12个。相对于这两个区段5.8S区段的变异位点和简约信息位点则较少分别为19个和4个。碱基的插入/缺失主要集中在ITS1区段,ITS2与5.8S区段的序列插入/缺失相对较少。三个区段中5.8S区段表现出很高的保守性。在17植绥螨中,碱基转换/颠换最多的是M.occidentalis,碱基插入/缺失则是T.pyri最多。
   通过ITS分子系统树显示,小新绥螨属和小植绥螨属亲缘关系较近,伊绥螨属则与真绥螨属亲缘关系较近。MP与NJ树都显示,静走螨属独立为一支,与其它各属亲缘关系较远。分子系统树显示,钝绥螨属的草栖钝绥螨划入真绥螨较多的一支,钝绥螨属的津川钝绥螨和A.alpinus划入新小绥螨较多一支。基于ITS基因序列构建的分子树显示该7属间关系为:{[(小新绥螨属+部分钝绥螨属)+小植绥螨属]+[(真绥螨属+部分钝绥螨属)+伊绥螨属)]+盲走螨属}+静走螨属。
   本文中所探讨的17种植绥螨为同一科不同属,利用ITS基因序列能较好地构建其分子系统树,了解其亲缘关系,这也说明ITS基因能较好地解决植绥螨属内种间低级阶元的系统发育关系。
   2、巴氏新小绥螨居群遗传多样性分析
   (1)ISSR-PCR反应体系优化:通过正交实验方法,建立了ISSR-PCR最佳扩增体系Taq DNA聚合酶0.20μL,MgCl21.5μL,dNTPs0.625μL,Primer0.25μL,10×PCR Buffer2.5μL,模板DNA4μL,ddH2O15.925μL,总体积25μL。
   (2)ISSR-PCR扩增结果:实验共筛选出13条引物,分别对赣州三个居群进行ISSR-PCR扩增,产生52条带,其中22条为多态性条带,多态性条带百分比(PPB)达到42.31%。
   (3)遗传多样性分析:多态性条带百分比PPB、Shannon多样性指数Ⅰ及期望杂合度He对居群遗传多样的评价结果相一致:安远居群的遗传多样性高于大余与信丰,大余与信丰两地的居群则遗传多样性差异不显著;
   (4)居群遗传结构和基因流:居群间的遗传分化系数Gst=0.6810,说明大部分的遗传多样性分布在居群内。Nei’s无偏遗传距离UPMGA聚类分析显示3个居群的关系可表示为大余和信丰两个居群几乎无差异,而安远则与上述两个居群的亲缘关系相对较远,但差异不大。

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