临床应用改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞成脂分化和细胞增殖影响

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目的:讨论临床应用Tubex改良法制各自体富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)对兔来源脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)成脂分化及细胞增殖的影响。
　　方法:Ⅰ型胶原酶消化获得的新西兰大白兔附睾部脂肪组织，体外分离、培养得到脂肪间充质干细胞，采用形态学和多向诱导分化进行鉴定。取新西兰大白兔腹主静脉血，传统二次离心法和Tubex（封闭离心装置）改良法制备PRP(platelet-richplasma)，显微镜下分别对两组PRP行血小板计数。CCK-8试剂盒，采用酶标仪于450nm处分别测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不同时间点(7d、10d、14d)吸光度值。在同等条件下，经异丙醇萃取出细胞内脂滴染色的油红O，酶标仪于510nm处测定Tubex改良法PRP组、传统二次离心法PRP组、对照组、空白组四组细胞在不同时间点(7d、10d、14d)成脂细胞内脂滴的含量。
　　结果:
　　 1.附睾部脂肪垫提取出的脂肪干细胞，贴壁早期为椭圆形，逐渐变为长梭状，随着细胞生长增殖，呈漩涡状排列;倒置显微镜下，形态学符合干细胞形态。经成脂和成骨诱导，于14天分别用油红O染色和茜素红染色，均能成功着色，证实为脂肪细胞和骨细胞，证明了细胞的多向诱导分化能力。
　　 2.经血小板计数，发现血小板数量在Tubex法制备的PRP中明显高于传统二次法制备的PRP。
　　 3.Tubex改良法制备PRP和传统二次离心法制备PRP进行干预的两组细胞，相比较正常诱导组，脂滴染色的细胞较多，萃取出的油红O含量较高，吸光度值较高，其中Tubex改良法制备PRP组脂滴染色的细胞更多，萃取出的油红O含量更高，吸光度值也更高。
　　 4.CCK-8测量的吸光度值显示，同一时间段，正常全培培养的空白组细胞吸光度值最低，两组PRP组的细胞较正常诱导组吸光度值高，其中Tubex组的吸光度值高于其它实验组。
　　结论:体外分离、培养所得的细胞经形态学和多向诱导分化，确定为兔来源脂肪间充质干细胞;Tubex法制备的PRP血小板浓度明显大于传统二次离心法所制各的PRP;相较于不加PRP的对照组，传统二次离心法和Tubex改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞的成脂分化、细胞增殖均有促进作用，Tubex改良法制备PRP对兔来源脂肪间充质干细胞的成脂分化、细胞增殖促进作用较为明显。

著录项

作者
彭祖荣;
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作者单位

大连医科大学;

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授予单位大连医科大学;
学科外科学
授予学位硕士
导师姓名胡刚;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R457.14;
关键词
TUBEX改良法; 各自体富血小板血浆; 脂肪间充质干细胞; 成脂分化; 细胞增殖;

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