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【6h】

基于氧化还原滴定检测血清抗氧化能力及其与HLA-DQB1多态性的关联

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目录

声明

摘要

前言

参考文献

第一章 高锰酸钾法测血清中抗氧化物质的微量板滴定法

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

1.稀释实验结果

2.重复性实验结果

3.临床标本检测结果

讨论

结论

参考文献

第二章 在琼脂介质中用高锰酸钾滴定法测定血清还原能力

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.稀释实验结果

2 批内、批间重复性实验结果

3 实验条件干扰实验结果

4.临床标本检测结果

讨论

结论

参考文献

第三章 在微板中测定血清中与碘单质反应的还原性物质方法建立

Materials and methods

1.Materials

2.Methods

Results

1.Results of dilution test

2.Results of repeatability test

3.Results of test in blood plasma

Discussion

Conclution

References

第四章 琼脂介质中测定血清中与碘单质反应的还原性物质

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1.稀释实验结果

2 批内和批间重复性实验结果

3 实验条件干扰实验结果

4 临床标本检测结果

讨论

结论

参考文献

第五章 氧化指标、临床常用生化指标及免疫指标检测

材料与方法

1.材料

2 方法

结果

1.两组人群用四种方法测定的血清抗氧化能力结果

2.比较两组人群中抗氧化能力结果

3.比较两组人群中四种天然抗体含量

4.两组人群中天然抗体指标分析(排秩后)

5.常用生化指标在两组人群中比较结果

6.抗氧化能力、天然抗体与常用生化指标相关性分析

讨论

参考文献

第六章 蛋白成分在建立的新方法中的测定

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

1.四种方法测定六种蛋白溶液以及六份血清结果

讨论

参考文献

第七章 人体内抗氧化能力的高低与HLA-DQB1基因多态性的关联

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.PCR扩增HLA-DQB1结果

2.HLA-DQB1等位基因在58份标本中的分布频率结果

3.HLA-DQB1等位基因与血清抗氧化能力相关性分析

讨论

结论

参考文献

全文总结

工作展望

综述

附录

致谢

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摘要

目的:本文基于氧化还原滴定,建立了四种测定人体血清中抗氧化能力的方法,为抗氧化能力的检测以及与抗氧化能力有关的疾病的诊断、治疗及预防提供可靠的依据;同时还观察了老年人抗氧化能力、免疫功能以及临床常用生化指标的变化,并在分子水平上研究HLA-DQB1基因多态性与人体抗氧化能力的关联。
   方法:
   1.在经典的高锰酸钾滴定法的基础上进行改进,分别创建了在96-微孔板以及在琼脂介质中测定血清中抗氧化能力的方法,并在稀释实验、重复性实验以及临床标本的检测中验证这两种方法的准确性以及潜在的临床运用价值。
   2.在经典的碘量法基础上进行改进,分别建立了在96-微孔板以及在琼脂介质中测定血清中与碘单质反应的抗氧化剂的抗氧化能力的方法,并在稀释实验、重复性实验以及临床标本的检测中验证这两种方法的准确性和潜在的临床运用价值。
   3.随机选择六份血清,并配制六种蛋白溶液,其浓度与血清中蛋白浓度相近,用以上新建立的四种方法分别测定这六份血清以及六份蛋白溶液的抗氧化能力,验证这四种方法是否可以测定出血清抗氧化剂中的有机部分(蛋白)。
   4.在医院的健康体检者中选取75岁以上的老年人血清,同时选取25-35岁之间的年轻体检者血清,分别用我们建立的四种方法测定两组人群中抗氧化能力的大小,并同时检测四种天然抗体(抗卵清蛋白抗体、抗淀粉多糖抗体、抗鱼精蛋白抗体和抗伤寒多糖抗体)、临床常用生化指标(谷丙转氨酶、r-谷氨酰转移酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、总蛋白、白蛋白、白球比、尿素、肌酐、葡萄糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白)在两组人群中的差异,并分析抗氧化能力的大小与天然抗体的含量以及常用临床生化指标是否有关联。
   5.同时采集上述两组人群的全血标本,采用PCR-SSP技术检测两组人群中的HLA-DQB1等位基因,分析HLA-DQB1等位基因与抗氧化能力的关联。
   结果:
   1.新建立的高锰酸钾微量板滴定法测定血清中抗氧化能力,其血清稀释实验具有良好的线性关系,重复性实验中,批内稳定性实验的CV值为0.929%,批间稳定性实验的CV值为0.692%,表示该方法具有良好的稳定性;用本法测定的血清总抗氧化能力,老年组明显低于年轻组,且具有统计学意义(P<0.05)。
   2.新建立的在琼脂介质中运用高锰酸钾滴定法测定血清总抗氧化能力,其血清稀释实验具有良好的线性关系,在重复性实验中,批内稳定性实验CV值为2.246%,批间稳定性实验CV值为5.350%,表明该方法具有良好的稳定性;用本法测定的血清总抗氧化能力,老年组明显低于年轻组,且具有统计学意义(P<0.05)。
   3.新建立的在微板中测定血清中与碘单质反应的物质的抗氧化能力,其血清稀释实验具有良好的线性关系,在重复性实验中,批内稳定性实验CV值为3.329%,批间稳定性实验CV值为7.219%,表明该方法具有良好的稳定性;用本法测定的血清总抗氧化能力,老年组明显低于年轻组,且具有统计学意义(P<0.05)。
   4.新建立的在琼脂介质中测定血清中与碘单质反应的物质的抗氧化能力,其血清稀释实验具有良好的线性关系,在重复性实验中,批内稳定性实验的CV值为3.942%,批间稳定性实验CV值为22.390%;用本法测定的血清总抗氧化能力,老年组明显低于年轻组,具有统计学意义(P<0.05)。
   5.新建立的四种方法主要测定血清抗氧化系统中的蛋白成分,且蛋白成分在血清抗氧化能力中发挥主要作用。
   6.四种方法测定的老年组血清抗氧化能力明显低于青年组血清抗氧化能力,p值小于0.05,;四种天然抗体(抗卵清蛋白抗体、抗淀粉抗体、抗伤寒多糖抗体以及抗牛血清白蛋白抗体)在老年组血清中明显升高,p值均小于0.05,有显著差异;常用临床生化指标检测中,总蛋白,白蛋白,白球比老年组相较于青年组明显降低,谷草转氨酶,乳酸脱氢酶,尿素,葡萄糖,甘油三酯,总胆固醇老年相较于青年组明显升高(P<0.05)
   7.在相关性分析中,我们发现抗氧化能力的大小与天然抗体的含量无显著性差异;抗氧化能力的大小与肝功能中的乳酸脱氢酶,白蛋白,总蛋白和白球比有显著的相关性,P值均小于0.05;在HLA-DQB1基因多态性与抗氧化能力相关性分析中,发现人血清中抗氧化能力的高低与HLA-DQB1*05位点呈现显著性相关。
   结论:
   1.四种方法可以准确测定出人血清中的抗氧化剂的抗氧化能力,并具有临床应用价值。
   2.HLA-DQB1*05基因可能与抗氧化能力的高低存在一定的关联。

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