三氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性的影响及端粒酶在人胃癌基因治疗中的应用

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胃癌在中国各种恶性肿瘤中占首位,每年死于胃癌的患者约16万.因此,针对胃癌治疗的研究成为临床和基础研究工作的重点,特别是随着人类基因组计划的完成,基因治疗将成为二十一世纪肿瘤治疗的重点策略.端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白聚合酶,它能以自身的RNA作为模板合成端粒,弥补端粒丢失,对维持端粒长度,使细胞获得永生化起重要作用.端粒酶是迄今发现的一个最为广谱和特异的肿瘤标志物,与细胞衰老、永生化和肿瘤的发生、发展有密切关系.端粒酶之所以能成为肿瘤治疗的新靶点,在于大多数正常组织中没有活性或活性极低,而85﹪以上的恶性肿瘤具有很高的端粒酶活性.人的端粒酶复合物由多种成份组成,但是端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)却是控制端粒酶活性的关键组分.在细胞永生和肿瘤进展过程中端粒酶的激活需要诱导hTERT的表达.最近的研究报道,hTERT基因与端粒酶活性具有密切的相关性.因此,利用hTERT基因作为肿瘤治疗的靶点,将使基因治疗更具有明确的靶向性.基于此思路,我们首先研究了三氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性的影响及可能的作用机制,为三氧化二砷作为端粒酶抑制剂用于胃癌的治疗提供新的理论依据.其次,我们探讨了端粒酶逆转录酶基因在人胃癌细胞基因治疗中的作用.论文一三氧化二砷对人胃癌BGC-823细胞端粒酶的影响;目的:研究三氧化二砷对人胃癌BGC-823细胞端粒酶的影响及可能的作用机制.方法:以不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC-823细胞,通过MTT法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡;TRAP PCR ELISA方法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR半定量方法检测细胞端粒酶hTERT基因mRNA的转录水平.三氧化二砷对人胃癌BGC-823细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现：一是诱导细胞凋亡，另一个是通过下调hTERT基因mRNA的转录来下调细胞的端粒酶活性.论文二端粒酶反义hTERT基因逆转录病毒载体的构建;目的：构建反义人端粒酶逆转录酶（hTERT)基因真核表达载体.方法：一步法从人慢性髓原白血病细胞株K562细胞中提取总RNA，通过逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）扩增出人端粒酶逆转录酶基因起始密码子至下游长156个碱基的DNA片断，反向连入逆转录病毒载体pLNCX的限制性内切酶Hind Ⅲ和Cla Ⅰ酶切位点上，即构建成hTERT的反义表达载体，并经酶切鉴定和测序确认.结论：成功构建了人端粒酶hTERT基因反义表达载体，为进一步研究反义hTERT基因转染对胃癌细胞端粒酶及生物学行为的影响奠定了基础.论文三端粒酶反义hTERT基因转染对人胃癌细胞系的影响;目的：将构建成功的人端粒酶反义hTERT基因逆转录病毒载体转染人未分化胃癌细胞系HGC-27，并观察其对人胃癌细胞生物学特性的影响，探讨反义hTERT基因治疗的可行性.结论：外源端粒酶反义hTERT基因通过封闭hTERT基因的mRNA，抑制其表达，从而抑制胃癌细胞端粒酶活性，进一步显著抑制HGC-27细胞的生长并促进其凋亡.端粒酶反义hTERT基因，可能应用于胃癌的基因治疗.论文四端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体的构建和鉴定;目的：利用端粒酶逆转录酶基因启动子，构建能在人肿瘤细胞中特异表达目的基因的表达载体.结论：成功构建了由端粒酶逆转录酶基因启动子调控的肿瘤细胞靶向表达载体，并证明了端粒酶逆转录酶基因启动子调控的表达载体具有明确的靶向性.

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作者
尹家俊;
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作者单位

大连医科大学;

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授予单位大连医科大学;
学科中西医结合临床
授予学位博士
导师姓名胡祥;
年度 2003
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类胃肿瘤;
关键词
三氧化二砷; 端粒酶; 端粒酶逆转录酶; 基因治疗; 反义基因; 胃肿瘤;

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