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【6h】

头孢克肟与牛血清白蛋白相互作用及微生物活性测定中的荧光分析方法研究

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目录

声明

摘要

第1章 概述

1.1 引言

1.2 蛋白质的结构和功能信息

1.3 血清白蛋白

1.4 药物小分子与血清白蛋白相互作用的研究方法

1.4.1 紫外-可见吸收光谱法(UV-visible absorption spectroscopy)

1.4.2 荧光光谱法(Fluorescence spectrum)

1.4.3 圆二色光谱法(Circular dichroism spectrum,CD)

1.4.4 红外光谱法(Infrared spectroscopy,IR)

1.4.5 核磁共振波谱法(Nuclear magnetic resonance spectroscppy,NMR)

1.4.6 电化学分析法(Electrochemical analysis)

1.4.7 色谱分析法(Chromatography)

1.4.8 其他方法

1.5 药物小分子与血清白蛋白相互作用的研究内容

1.5.1 荧光猝灭机理分析

1.5.2 结合部位的确定

1.5.3 结合常数和结合位点数的测定

1.5.4 作用力类型的确定

1.5.5 结合距离的确定

1.5.6 药物小分子对血清白蛋白构象的影响

1.5.7 影响结合反应的因素

1.6 研究现状与选题意义

第2章 头孢克肟与牛血清白蛋白相互作用研究

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 主要实验仪器

2.2.2 试剂及配制

2.2.3 实验方法

2.3 实验结果与讨论

2.3.1 实验参数的优化

2.3.2 头孢克肟与BSA之间的作用

2.3.3 头孢克肟对BSA的荧光猝灭光谱

2.3.4 荧光猝灭机理分析

2.3.5 结合常数和结合位点数的确定

2.3.6 热力学参数和作用力的确定

2.3.7 结合作用距离的确定

2.3.8 头孢克肟对BSA构象的影响

2.4 小结

第3章 环境样品中微生物活性的荧光分析方法的初步研究

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 供试土样

3.2.2 供试试剂

3.2.3 溶液配制

3.2.4 主要仪器设备

3.2.5 试验方法

3.2.6 标准曲线的绘制

3.3 实验结果与讨论

3.3.1 实验原理

3.3.2 实验参数优化

3.3.3 分析性能

3.3.4 土壤样品的微生物活性测定及回收率

3.3.5 土壤样品的微生物活性的垂直分布特征

3.4 小结

第4章 结论

参考文献

致谢

在读硕士期间撰写的论文

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摘要

本文研究了药物小分子头孢克肟与牛血清白蛋白的相互作用,并建立了环境样品中微生物活性测定的荧光分析新方法。
  论文第一部分简要介绍了蛋白质的结构与功能,血清白蛋白的组成、结构特点、生理功能,并对药物小分子与血清白蛋白相互作用的研究方法与研究内容做了详细的论述。
  论文第二部分利用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色光谱技术研究了头孢克肟与牛血清白蛋白的相互作用。采用单因素轮换法优化实验参数得到头孢克肟与牛血清白蛋白相互作用的最佳生理模拟条件。在这一条件下,测定光谱数据。根据所测得的光谱数据,分析了头孢克肟对蛋白质荧光的猝灭机制,并分别计算出在不同温度下药物与蛋白质的结合常数、结合位点数、热力学参数。根据F(o)rster的非辐射能量转移理论,求得了小分子和蛋白质间的结合距离和能量转移效率。根据计算的热力学参数值,确定了结合力的类型。依据紫外-可见吸收光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱和圆二色光谱分析了头孢克肟对蛋白质构象的影响。
  论文第三部分提出了荧光光度法测定环境样品中微生物活性的新方法。基于荧光素二乙酸酯(FDA)易被细菌及真菌中的非专一性酶(酯酶、蛋白酶、脂肪酶)催化水解为荧光素这一原理,采用丙酮作为终止剂,荧光光度计作为检测器建立了测定环境样品中微生物活性的新方法。通过物理和化学参数的优化,提高了测定方法的灵敏度。在最佳实验条件下,方法的线性范围和检出限分别为2-2000μg/L(R=0.9971)和3.1×10-2μg/L;对同一土壤样品平行测定五次,相对标准偏差为2.8%;对四种土壤样品测定,回收率在90.6-104%之间;并成功地将本法用于土壤样品不同剖面深度的微生物活性的测定。
  论文第四部分对实验内容进行了简单的总结,并对头孢克肟与牛血清白蛋白相互作用研究以及测定环境样品中微生物活性的新方法的应用前景做了展望。

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