辽宁碱蓬S/NAC4、S/NAC10转录因子基因克隆及功能分析

声明

摘要

1 文献综述

1．1 胁迫

1．2 转录因子

1．2．1 转录因子的结构

1．2．2 转录因子的分类

1．2．3 转录因子的研究方法

1．3 NAC转录因子

1．3．1 NAC转录因子的结构

1．3．2 NAC转录因子的功能

1．3．3 NAC转录因子的研究现状及展望

1．4 辽宁碱蓬

1．5 研究目的及意义

1．6 本研究的技术路线

2 SINAC4、SINAC10基因克隆及生物信息学分析

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 菌株和质粒

2．1．3 试剂

2．1．4 培养基

2．1．5 引物

2．1．6 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 SINAC4、SINAC10基因cDNA全长的获得

2．2．2 SINAC4、SINAC10基因生物信息学分析

2．3 实验结果与分析

2．3．1 SINAC4、SINAC10基因全长的获得

2．3．2 SINAC4、SINAC10基因生物信息学分析

2．4 讨论

3 SINAC4、SINAC10基因表达特性分析

3．1 实验材料

3．1．1 植物材料

3．1．2 实验试剂

3．1．3 仪器设备

3．1．4 引物

3．2 实验方法

3．2．1 辽宁碱蓬幼苗培养及非生物胁迫处理

3．2．2 总RNA的提取及检测

3．2．3 反转录成cDNA

3．2．4 实时荧光定量PCR

3．3 实验结果

3．3．1 辽宁碱蓬总RNA的提取

3．3．2 SINAC4、SINAC10基因在辽宁碱蓬中的表达特异性

3．4 讨论

4 SINAG4、SINAC10亚细胞定位分析

4．1 实验材料

4．1．1 植物材料

4．1．2 实验试剂

4．1．3 仪器设备

4．1．4 引物

4．2 实验方法

4．2．1 亚细胞定位载体的构建

4．2．2 洋葱表皮细胞转化

4．2．3 洋葱表皮细胞镜检

4．3 实验结果

4．3．1 亚细胞定位载体的构建

4．3．2 亚细胞定位

4．4 讨论

5 SINACA、SINAC10转录激活作用分析

5．1 实验材料

5．1．1 菌株

5．1．2 实验试剂

5．1．3 相关溶液的配制

5．1．4 设备仪器

5．1．5 引物

5．2 实验方法

5．2．1 酵母表达载体构建

5．2．2 制备酵母菌感受态细胞

5．2．3 阳性质粒转化酵母菌

5．2．4 β-半乳糖苷酶活性检测

5．3 实验结果

5．3．1 酵母表达载体的构建

5．3．2 转录激活作用分析

5．4 讨论

6 SINAC4．SINAC10基因转化拟南芥及转基因拟南芥抗逆性分析

6．1 实验材料

6．1．1 植物材料

6．1．2 实验试剂

6．1．3 仪器设备

6．1．4 引物

6．2 实验方法

6．2．1 植物表达载体的构建

6．2．2 农杆菌转化拟南芥

6．2．3 阳性拟南芥的筛选

6．2．4 转基因拟南芥半定量RT-PCR分析

6．2．5 转基因拟南芥的抗性分析

6．3 实验结果

6．3．1 植物表达载体的构建

6．3．2 转基因拟南芥的筛选

6．3．3 外源基因在转基因拟南芥半中的表达

6．3．4 转基因拟南芥的胁迫分析

6．4 讨论

结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢