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【6h】

麦系作物中尿囊素的提取与分析

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文摘

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1.绪论

1.1 麦系作物简介

1.1.1 小麦

1.1.2 大麦

1.1.3.燕麦

1.1.4 青稞

1.1.5 荞麦

1.2 尿囊素

1.3 柱层析

1.4 手性分离

1.5 同分异构体

2 尿囊素的提取及含量测定

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 主要仪器、试剂与样品

2.2.2 样品

2.2.3 样品前处理

2.2.4 尿囊素的粗提

2.2.5 尿囊素提取条件的选择

2.2.6 样品提取条件的确定

2.2.7 样品中尿囊素的提取

2.2.8 色谱条件的选择

2.2.9 色谱条件的确定

2.2.10尿囊素对照品溶液的制备

2.2.11标准曲线的绘制

2.2.12精密度实验

2.2.13回收率实验

2.2.14最低检出限

2.3 结果

2.3.1 尿囊素对照品与样品尿囊素色谱图

2.3.2 样品中尿囊素含量的测定

2.4 结论

3 麦系作物中尿囊素的清除羟基自由基能力的测定

3.1 引言

3.2 方法原理

3.3 实验部分

3.3.1 仪器与试剂

3.3.2 样品

3.3.3 色谱条件

3.3.4 催化离子的选择

3.3.5 CO2+用量的影响

3.3.6 缓冲溶液pH值的选择

3.3.7 过氧化氢用量的影响

3.4 样品对羟基自由基清除率的测定

3.5 结果与讨论

4 麦系作物中的尿囊素的提纯

4.1 引言

4.2 仪器与试剂

4.3 样品

4.4 尿囊素的提纯试验

4.4.1 检测方法的选择

4.4.2 洗脱剂的选择

4.4.3 洗脱剂流速的选择

4.4.4 进样时间的选择

4.5 尿囊素提纯实验

4.6 尿囊素对照品与样品纯化后的尿囊素液相色谱

4.7 尿囊素对照品与样品纯化后的尿囊素的红外光谱

4.7 尿囊素对照品与样品纯化后的尿囊素液相色谱-串联质谱分析

4.8 结果与讨论

5 尿囊素异构体的分离

5.1 尿囊素手性对映体拆分

5.1.1 引言

5.1.2 实验部分

5.1.3 结果与讨论

5.2 尿囊素同分异构体分离

5.2.1 引言

5.2.2 实验部分

5.2.3 讨论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢

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摘要

本文首次对麦系作物中尿囊素进行了研究,探索尿囊素提取、提纯条件,确定测定尿囊素的方法,研究其羟基自由基的清除能力,并进行手性对映体和同分异构体的分离。
   采用回流法与超声法进行单因素试验与正交试验,最佳提取条件为回流法提取试剂为60%的乙醇,料液比1:15,超声温度40℃,超声时间20 min,提取两次。用HPLC测定其含量、对羟基自由基清除率及手性对映体的拆分,含量与羟基自由基清除率以Kromasil C18为固定相柱,流动相甲醇:水(5:95,V:V);流速0.5 mL/mim柱温35℃;手性拆分以卵类粘蛋白手性固定相,流动相甲醇-磷酸二氢钾(0.01 mol/L)=15:85(V:V),pH4.00;流速0.5 mL/mim柱温25℃。用自制柱层析装置纯化尿囊素提取液,洗脱剂为氯仿:甲醇(V:V)=1:3、流速2.0 mL/min、进样时间30 s。用紫外分光光度法对尿囊素同分异构体进行转化。
   HPLC测定尿囊素含量变异系数小于1.1%;回收率95.80%~105.4%;最低检出限0.5μg/mL;尿囊素含量范围是77.95~395.05μg/g,含量由高到低依次是辽宁麦麸、辽宁小麦、青稞麸、青稞、山东麦麸、山东小麦、大麦麸、大麦、燕麦麸、燕麦、苦荞麸、苦荞、四川麦麸、四川小麦、河套面粉香雪面粉,尿囊素清除羟基自由基清除能力与其含量高低成正比关系,经提纯尿囊素的纯度80%以上,经手性拆分尿囊素对映体完全实现拆分,分离度为2.750。UV检测pH1.92~9.0尿囊素为酮式结构;pH10.00~12.87尿囊素全部转化为烯醇式。

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