半水硫酸钙/硅酸三钙复合物对兔骨髓基质干细胞增殖和成骨向分化的影响研究

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目的：
　　评价半水硫酸钙/硅酸三钙复合骨水泥对兔骨髓基质干细胞(rabbit bonemarrow stromal cells，rBMSCs)增殖和成骨方向分化的生物学行为的影响，为其成为骨缺损替代材料提供生物学依据。
　　方法：
　　1、分组:实验组为半水硫酸钙/硅酸三钙复合物，对照组为半水硫酸钙，分别制备各组材料的浸提液，常规培养液为阴性对照。
　　2、rBMSCs的原代培养及鉴定。
　　3、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法分析两组材料对骨髓基质干细胞的毒性，筛选材料适宜浓度。
　　4、流式细胞仪检测细胞周期并计算增殖指数，分析两种材料对骨髓基质干细胞增殖的影响。
　　5、采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)和骨钙素(osteocalcin，OCN)含量测定技术分析两种材料对rBMSCs成骨向分化的影响。
　　结果：
　　1、细胞原代培养与鉴定:显微镜下可见，原代rBMSCs以长梭形为主，融合的细胞以放射状或旋涡状方式排列生长。5代以内传代细胞形态与原代细胞相似，在传代的第3天到第6天细胞进入对数增殖期。经成骨诱导液定向诱导分化后，碱性磷酸酶染色显示，诱导细胞的细胞质呈深蓝色;茜素红染色见诱导细胞胞间有明显深染的钙结节形成。
　　2、MTT检测结果显示:与对照组相比适宜稀释比(1/40)的半水硫酸钙/硅酸三钙复合物浸提液对rBMSCs无毒性作用，可以促进细胞的增殖(P＜0.05）。选择1/40稀释比的材料浸提液用于后续实验。
　　3、流式细胞仪检测细胞周期:rBMSCs在两组材料浸提液中的增殖指数均大于阴性对照组(P＜0.05），但两组材料间差异不具有统计学意义。这表明适宜稀释比的半水硫酸钙/硅酸三钙复合物能促进rBMSCs的增殖。
　　4、ALP定量检测:10、14d时，rBMSCs在半水硫酸钙/硅酸三钙复合物浸提液中ALP的表达量高于阴性对照组和纯半水硫酸钙组（P＜0.05），而后两组间ALP表达量差异不具有统计学差异。表明半水硫酸钙/硅酸三钙复合物能促进rBMSCs的分化。
　　5、OCN定量检测:三组细胞的OCN值从10、14、17、21 d随时间逐渐升高，在14、17、21 d时，rBMSCs在半水硫酸钙/硅酸三钙复合物浸提液中OCN的表达量高于阴性对照组和纯半水硫酸钙组(P＜0.05），而后两组间OCN表达量差异不具有统计学意义。表明半水硫酸钙/硅酸三钙复合物能促进rBMSCs的分化。
　　结论：
　　与纯半水硫酸钙相比，半水硫酸钙/硅酸三钙复合物具有相近的优良细胞相容性，同时具有诱导rBMSCs成骨向分化的能力。有望在骨缺损代替材料领域获得应用。

著录项

作者
秦丽梅;
展开▼
作者单位

中国医科大学;

展开▼
授予单位中国医科大学;
学科口腔医学；口腔临床医学
授予学位硕士
导师姓名吴琳;
年度 2015
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 TB347;
关键词
复合骨水泥; 半水硫酸钙; 硅酸三钙; 骨髓基质干细胞; 细胞增殖; 成骨能力; 细胞分化;

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