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视网膜缺血再灌注损伤中盐皮质激素受体的激活及其阻断剂的视神经保护作用

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摘要

前言
　　 肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在血压调节以及电解质平衡等方面具有重要作用。近年来,许多研究结果证实,除了传统概念所指的RAAS系统之外,在一些组织器官内还存在着局部RAAS系统,其中包括眼睛。尤其在视网膜内,已有研究在视网膜内分离出了包括肾素,血管紧张素,血管紧张素转化酶等的mRNA,而这些都是RAAS系统的重要组成成分。因此,RAAS系统在眼内,尤其是视网膜内必定起着重要的作用,并且这一作用是独立于经典概念中存在于血液中的RAAS系统的作用。尽管目前关于眼部RAAS系统的相关研究报道已不占少数,但是大多数研究都主要围绕血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),目前很少有研究针对其下游产物醛固酮(Aldosterone)以及其受体盐皮质激素受体(MR),因此本实验拟研究这两者在视网膜缺血再灌注损失的模型下的作用。
　　 研究方法
　　 采用随机数字表法将大鼠分为缺血损伤组,假手术对照组以及空白对照组。缺血损伤组分为醛固酮组,螺内酯组,安慰剂组,其中醛固酮组包括醛固酮(全身给药)组,醛固酮(局部给药)组,醛固酮(全身给药)与坎地沙坦联合给药组,醛固酮(局部给药)与坎地沙坦联合给药组,螺内酯组根据给药浓度高低分为1mg/kg/d组,10mg/kg/d组,100mg/kg/d组及螺内酯(10mg/kg/d)与坎地沙坦联合给药组。
　　 1.采用升高眼压法制作缺血再灌注模型:将眼内压升高至130mmHg并持续45分钟,7天后处死取材,HE染色观察视网膜各层厚度变化;
　　 2.采用上丘注射荧光染料法逆行标记视网膜神经节细胞(RGCs),7d后处死大鼠并制备视网膜铺片,荧光显微镜下观察RGCs数量:
　　 3.通过测量视网膜各层厚度及视网膜神经节细胞计数评估视网膜损伤情况。
　　 4.WesternBlot法检测并比较缺血再灌注损伤后不同时间点视网膜内MR表达情况
　　 5.应用Dunnett's多重比较及Student'st检验统计分析相关数据。
　　 结果
　　 通过对比各组中缺血损伤眼于正常对照眼的视网膜厚度及神经节细胞数量发现:在坎地沙坦组,螺内酯(10mg/kg/d)组,及坎地沙坦联合螺内酯组给药组中发现视网膜缺血损伤得到了显著的抑制;在坎地沙坦与醛固酮联合给药组中视网膜缺血损伤并未得到抑制,即醛固酮的加入阻断了坎地沙坦的保护作用;在单独给予醛固酮的缺血损伤组中,视网膜缺血损伤未得到抑制。在非缺血损伤组中玻璃体局部注射醛固酮可使得视网膜神经节细胞数量显著减少,但视网膜厚度无明显变化。缺血损伤后,视网膜内MR表达量升高,并于12小时达到峰值。
　　 结论
　　 视网膜内存在着局部醛固酮/盐皮质激素受体系统;对视网膜缺血再灌注损伤大鼠使用MR阻断剂可以起到显著的保护作用,该发现为视网膜缺血性疾病的治疗提供了新的思路。

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