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不同剂量橄榄油对大鼠血胆固醇水平的影响及其机制研究

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实验材料和方法

实验结果

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结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 单不饱和脂肪酸对血脂影响的研究进展

致谢

个人简介

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摘要

随着经济的发展和人们生活方式的改变，心脑血管疾病已经成为严重危害人们健康的疾病之一。心脑血管疾病的病因目前尚不完全清楚，但血脂异常特别是高胆固醇血症是导致心脑血管疾病发生发展的主要危险因素已经得到了大多数研究的支持，所以维持正常的血脂水平显得尤为重要而且迫切。 肝脏在调节机体胆固醇平衡中发挥着重要作用。首先，3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶( hepatic3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A，HMG-CoAreductase)是胆固醇合成的限速酶。其次，胆固醇在肝中转化为胆汁酸是其在体内代谢的主要去路，而胆固醇7α-羟化酶(Cholesterol7α-Hydroxylase，CYP7A1)是调节胆汁酸合成的限速酶，所以这两个酶在维持机体胆固醇的内稳态中起重要作用。本研究拟采用不同剂量的橄榄油替代高脂饲料中相应比例的猪油，观察对大鼠血胆固醇水平、肝脏中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1mRNA表达量的影响，研究橄榄油是否能通过在转录水平调节这两个基因的表达而影响血胆固醇水平，以求阐明橄榄油对大鼠血胆固醇水平影响的机制，为指导居民合理膳食，预防营养相关的慢性病提供科学依据。 材料与方法： 一、动物分组 选择45只健康雄性Wistar大鼠，体重100g-135g。适应性饲养1w后，按体重随机分为5组(每组9只)：基础对照组(基础组)，猪油对照组(猪油组)，橄榄油低剂量组(橄榄油Ⅰ组)，橄榄油中剂量组(橄榄油Ⅱ组)，橄榄油高剂量组(橄榄油Ⅲ组)。基础组喂基础饲料，猪油组喂猪油高脂饲料(83.75％的基础饲料，15％猪油，0.25％胆盐，1％胆固醇)。各橄榄油干预组的饲料分别用6％、10％、15％的橄榄油代替猪油高脂饲料中相同比例的猪油，干预8W。 二、样品采集 实验结束时，对大鼠进行称重；禁食12h后，在乙醚麻醉下，由腹主动脉采血，分离血清；同时分离肝脏及双侧肾周、附睾周围和肠系膜等处脂肪，分别称重记录。 三、指标分析 (1)血脂测定：按试剂盒说明，在ECOM-F6124半自动生化分析仪(德国Eppendorf)上测定血清中总胆固醇(Total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、甘油三酯(triglycerides，TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)。 (2)观察各组大鼠肝脏病理改变：观察各组大鼠肝脏的形态、质地及色泽的改变；取小块肝组织放入10％中性甲醛中固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察大鼠肝组织病理学改变。 (3)计算肝指数和脏器周围脂肪/体重比值 ①肝指数(％)=肝重(g)/体重(g)×100； ②肾周脂肪重/体重比值(％)=双侧肾周脂肪重(g)/体重(g)×100； ③睾丸周围脂肪重/体重比值(％)=双侧睾丸周围脂肪重(g)/体重(g)×100； ④肠系膜脂肪重/体重比值(％)=肠系膜脂肪垫重(g)/体重(g)×100； ⑤总脂肪重/体重比值(％)=[双侧肾脏周围脂肪重(g)+双侧附睾周围脂肪重(g)+肠系膜脂肪垫重(g)]/体重(g)×100； (4)肝脏中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA表达量的测定：将保存于-70℃冰箱中的肝组织取出，按Takara RT-PCR试剂盒说明扩增各组大鼠肝脏中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA。逆转录反应条件为：30℃10min，42℃30min，99℃5min，5℃5min。扩增反应条件为：94℃2min；94℃30sec，54℃30sec，72℃1min，31个循环；再在72℃延伸lOmin。PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，在电泳凝胶成像分析仪上照相，以各目标产物灰度值×面积与GAPDH产物的灰度值×面积的比值表示该指标的相对表达量。 四、统计分析 实验结果用-x±s表示，用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析，组间两两比较用LSD法，检验水准α=0.05。 结果： 一、各组大鼠一般状况及体重变化 实验期间，除橄榄油Ⅱ组有一只大鼠死亡外，其余各组大鼠生长发育基本正常，未见异常表现。各组大鼠体重增量、摄食量和饲料效价间的差异均无统计学意义(P>0.05)。 二、各组大鼠血脂水平 比较各组大鼠血TC、LDL-C水平，均以橄榄油Ⅲ组最高。在TC水平上，猪油组、橄榄油Ⅰ组、橄榄油Ⅱ组、橄榄油Ⅲ组均明显高于基础组(P<0.05)；橄榄油Ⅱ组、橄榄油Ⅲ组的LDL-C水平也明显高于基础组(P<0.05)，橄榄油Ⅲ组LDL-C水平还高于猪油组(P<0.05)。比较各组HDL-C水平，橄榄油Ⅱ组、橄榄油Ⅲ组低于基础组(P<0.05)，橄榄油III组低于猪油组(P<0.05)。在TG水平上，以橄榄油Ⅱ组最高，与基础组的差异具有统计学意义(P<0.05)。 三、各组大鼠肝指数和内脏脂肪/体重比值 与基础组比较，其他各组大鼠肝指数均有升高(P<0.05)；橄榄油Ⅲ组大鼠各部位脂肪体比均低于其他各组，但其间差异无统计学意义(P>0.05)；橄榄油Ⅰ组、Ⅱ组大鼠睾周脂肪/体重、肠系膜脂肪/体重、内脏脂肪/体重高于基础组大鼠的相应指标，其间差异具有统计学意义( P<0.05)。 四、各组大鼠肝脏病理改变 观察各组大鼠肝脏大体标本，基础组大鼠肝脏颜色鲜红，边缘锐利，质地柔软，而其它各组大鼠的肝脏呈土黄色，边缘变钝，质地变硬，切面呈油腻感。由各组大鼠肝脏切片可见：基础组大鼠肝细胞形态正常，猪油组大鼠的肝脏中均有少数肝细胞发生了脂肪变，但尚未达到脂肪肝的程度。不同剂量的橄榄油组大鼠均呈现出轻度脂肪肝的改变。 五、各组大鼠肝脏中HMG-CoA reductase和CYP7A1 mRNA的相对表达量 各组大鼠肝脏中HMG-CoA reductase mRNA和CYP7A1 mRNA相对表达量的差异均无统计学意义(P＞0.05)。 结论： 1、不同剂量橄榄油均未能表现出改善高脂模型大鼠血脂的作用，并且对血TC、LDL-C水平的升高作用比猪油还明显。 2、橄榄油对血脂水平的影响不是通过对大鼠肝脏中HMG-CoA reductase和CYP7A1 mRNA表达来实现的，可能存在其他作用机制。

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