甲壳素纤维增强骨组织工程支架材料对血管内皮细胞生物活性的影响

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目的：研究新型甲壳素纤维增强骨组织工程支架材料对血管内皮细胞生物活性的影响，以初步评价该材料的生物相容性，为临床筛选更好的骨移植替代材料及血管化组织工程骨的构建提供实验依据。方法：一、血管内皮细胞的培养与鉴定无菌条件下取健康产妇分娩的新鲜脐带，24h内采用血管内灌注消化液法原代培养人脐静脉内皮细胞，Ⅷ因子免疫组化染色鉴定血管内皮细胞。二、观察复合支架材料上内皮细胞的粘附生长情况体外培养人脐静脉内皮细胞并与复合支架材料联合培养。六块支架材料分别置于24孔培养板的六个孔中，传至第3代的人脐静脉内皮细胞按5×10<'5>cells/cm<'2>分别接种于支架上，37±0.5℃、5﹪CO<,2>，饱和湿度培养箱中放置4h后加培养基浸没材料，于培养箱中继续孵育。相差显微镜下逐日观察细胞与支架材料的附着情况，并分别于第3d、5d各取出三块复合细胞的支架材料，扫描电子显微镜观察细胞在支架材料上的生长情况。三、MTT比色试验测定复合支架材料对内皮细胞增殖的影响支架材料环氧乙烷消毒，浸提介质为DMEM培养基(含20﹪FBS，PH7.2～7.4)，按照IS010993-1标准要求，试样表面积/浸提介质=3cm<'2>/ml，将材料浸入培养基中，置于37±0.5℃，5％CO<,2>，饱和湿度培养箱中7d，吸出浸提液，无菌封存于4℃冰箱中备用。试验分三组，分别为浸提液组、阴性对照组和阳性对照组。将内皮细胞以1～5×10<'4>cells/ml、分三组接种于96孔培养板中，每组设复孔6个，每孔体积200μl，置于37±0.5℃，5％CO<,2>，饱和湿度培养箱中培养。24h后弃去原培养液，三组分别加入浸提液、DMEM培养基(含20％FBS、PH7.2～7.4)、0.7％(质量分数)聚丙烯酰胺(PVC)，分别于1、2、3、4、5d进行MTT比色试验，选择540nm波长，测定各孔光吸收值，以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生长曲线。采用SPSS10.0统计软件处理，各时间点浸提液组及阳性对照组分别与阴性对照组采用配对t检验比较，P值<0.05为有统计学意义。结论：血管内皮细胞在支架材料上粘附、增殖良好；支架材料不影响其生物活性，具有良好的生物相容性，是一种很有前景的骨组织工程支架材料；所建立的体外血管内皮细胞/甲壳素纤维增强骨组织工程支架三维模型为血管化组织工程骨的构建提供了实验基础，可以用于添加生长因子或其它重要添加物的骨组织工程的构建。

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作者
韩冰;
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作者单位

中国医科大学;

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授予单位中国医科大学;
学科口腔修复学
授予学位硕士
导师姓名杨晓东;
年度 2007
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类生物材料学;
关键词
骨组织工程; 甲壳素; 血管内皮细胞; 生物相容性; 支架材料; 骨移植;

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