S1P通过S1PR2抑制癌细胞迁移及其信号通路的研究

声明

摘要

英文缩略词

一．前言

二．材料与方法

2．1 材料

2．1．1 仪器设备

2．1．2 试剂溶液

2．2 方法

2．2．1 细胞培养

2．2．2 Real time PCR检测S1PRs表达

2．2．3 S1PR2 cDNA的克隆及克隆载体的构建

2．2．4 S1PR2 cDNA真核表达载体构建

2．2．5 S1PR2过表达A549细胞系建立

2．2．6 S1PR2在2种胃癌细胞迁移活性中的作用

2．2．7 S1PR2在SGC-7901细胞中抑制细胞迁移的信号通路研究

2．2．8 数据分析

三．结果

3．1 细胞中S1PRs的mRNA表达情况

3．2 胃癌细胞迂移活性检测

3．2．1 SGC-7901细胞迁移活性检测

3．2．2 BGC-803细胞迁移活性的检测

3．3 人鞘氨醇-1-磷酸2型受体S1PR2真核表达载体的构建

3．3．1 人鞘氨醇-1-磷酸2型受体S1PR2的cDNA克隆

3．3．2 重组质粒pMD19-T-S1PR2的双酶切(SalI和BamHI)鉴定

3．3．3 重组质粒pMD19-T-S1PR2的测序鉴定

3．3．4 表达载体pIRES2-EGFP的双酶切(SalI和BamHI)

3．3．5 重组表达载体pIRES2-EGFP-S1PR2双酶切鉴定

3．3．6 重组质粒pIRES2-EGFP-S1PR2的测序鉴定

3．4 S1PR2过表达A549细胞系的建立

3．4．1 A549细胞中转染表达载体pIRES2-EGFP-S1PR2后荧光显微照相

3．4．2 Real Time PCR相对定量结果

3．5 S1PR2过表达A549细胞迁移活性检测

3．6 SGC-7901细胞标准曲线和生长曲线的绘制

3．6．1 SGC-7901细胞的标准曲线绘制

3．6．2 SGC-7901细胞生长曲线绘制

3．7 S1P／S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的信号通路探究

3．7．1 PTX对S1P／S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响

3．7．2 PD98059对S1P／S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响

3．7．3 Y27632对S1P／S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响

3．7．4 BAY对S1P／S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响

四．讨论

五．结论

参考文献

文献综述

附录

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文与参与的科研项目