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力竭性运动对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞BK通道生物物理特性影响的初步研究

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引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

1.1.2 试剂

1.1.3 实验仪器

1.2 方法

1.2.1 力竭性大鼠动物模型的建立

1.2.2 平滑肌细胞的分离与培养

1.2.3 平滑肌细胞传代

1.2.4 平滑肌细胞的冻存和复苏

1.2.5 平滑肌细胞的鉴定

1.2.6 大鼠体重、心脏称重

1.2.7 单通道记录

1.2.8 数据处理和统计方法

2 结果与分析

2.1 高血压大鼠模型的鉴定

2.2 大鼠胸主动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流记录

2.2.1 正常大鼠胸主动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流

2.2.2 电压依赖性、钙离子依赖性的分析

2.2.3 力竭性运动对大鼠胸主动脉平滑肌细胞BKCa通道活性的影响

3 讨论

3.1 适用于膜片钳技术的平滑肌细胞分离及培养

3.2 高血压与动脉血管平滑肌细胞BKCa通道特性的关系

3.3 BKCa通道的力学门控与血管平滑肌细胞的分化与迁移

4 结论

参考文献

文献综述

1 膜片钳技术简介

1.1 膜片钳技术基本原理与特点

1.2 膜片钳记录的几种模式

2 BKCa通道研究进展

2.1 BKCa通道概述

2.2 BKCa通道的分子结构基础

2.3 BKCa通道生物物理特性

3 BKCa通道与血压的关系

3.1 BKCa在血管张力调节上的作用

3.2 原发性高血压与BKCa特性的关系

3.3 BKCa的增龄变化与高血压的关系

4 展望

参考文献

致 谢

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摘要

在血管平滑肌上已发现4种钾通道:①大电导钙激活性钾通道(BKca);②电压依赖性钾通道(Kv);③内向整流钾通道(Kir);④ATP敏感性钾通道(KATP)。在这些类型的钾离子通道中,大电导钙激活钾离子通道(BKCa)在平滑肌上广泛表达,在调节膜电位及血管平滑肌张力方面具有重要作用。已经证实其非正常的表达及功能紊乱与心血管疾病的发生有着密切的关系。
   本研究选用Sprague-Dawley(SD)雌性幼年大鼠,力竭性训练采用游泳的方式。具体方法是:力竭性训练组每天游泳2次,每次90min,两次训练之间间隔至少4hr。一周训练7天,共持续4周。在训练前进行8天进行预游泳训练,第一天游泳时间为10分钟,之后每天增加10分钟,每天训练两次,直到8天后,游泳时间达到90分钟后进行正式游泳训练。采用酶消化法为膜片钳实验提供大量SD大鼠原代胸主动脉平滑肌细胞。应用单通道内膜向外记录模式记录K+离子通道电流,并分析其特性变化。实验结果表明:①力竭性运动1周后,BKCa通道开放频率没有变化;力竭性运动2周后,BKCa通道开放频率发生增加;力竭性运动3周和4周后,BKCa通道开放频率明显增加。②力竭性运动后,BKCa通道的单通道电导没有发生显著变化。

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