首页> 中文学位 >2009甲型H1N1流感病毒样颗粒的制备、优化及其免疫原性研究
【6h】

2009甲型H1N1流感病毒样颗粒的制备、优化及其免疫原性研究

代理获取

目录

声明

缩 略 语 表

1 引言

1.1 流感概述

1.2 流感疫苗研究进展

1.3 霍乱毒素B亚基、蓖麻毒素B亚基及葡萄球菌肠毒素A的佐剂效应概述

2 2009甲型H1N1及嵌合CTB、RTB流感病毒样颗粒构建与鉴定

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

3 2009甲型H1N1及嵌合CTB、RTB流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

4 嵌合SEA流感病毒样颗粒构建与鉴定

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

5 嵌合SEA流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

5.5 小结

6 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介

展开▼

摘要

流感行性感冒(简称流感)是一种由流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病,传播速度快、传染性强。季节性流感的流行每年导致全球250,000~500,000人死亡。2009甲型H1N1流感的大流行对公共卫生安全更是构成了严重的威胁,随后该亚型流感演变成季节性流感,年度流行。目前防控流感的主要手段是接种疫苗。因此研制一种安全、有效、经济实用的流感疫苗是流感研究的主要关注点之一。在诸多疫苗研究方案中,病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在形态和结构上与天然病毒相似,可以诱导产生体液和细胞免疫反应,免疫原性强;不含遗传物质,安全性高。还可以增加靶向定位的分子佐剂,改造形成嵌合的病毒样颗粒。因此,本文在昆虫杆状病毒表达系统中构建了表达A/Changchun/01/2009(H1N1)毒株的HA、NA和M1的病毒样颗粒(VLPs)。在此基础上选择具有黏膜佐剂效用的霍乱毒素 B亚基(CTB)和蓖麻毒素B亚基(RTB)和可通过活化T细胞诱导超强免疫反应的葡萄球菌肠毒素A(SEA)作为分子佐剂构建嵌合VLPs,并在小鼠上评价免疫原性。
  1.2009甲型H1N1及嵌合CTB、RTB流感病毒样颗粒构建与鉴定。
  利用昆虫杆状病毒系统构建了表达A/Changchun/01/2009(H1N1)毒株HA、NA和 M1的病毒样颗粒(VLPs),又分别嵌合表达膜锚定分子佐剂CTB、RTB构建出嵌合病毒样颗粒CTB-VLPs、RTB-VLPs。经间接免疫荧光和Western blot鉴定所有的蛋白表达正确,在电镜下观察可见直径在100nm左右,呈圆形、表面有典型纤突的流感病毒样颗粒。血凝试验证明构建的病毒样颗粒可有效凝集鸡红细胞。嵌合CTB、RTB后的病毒样颗粒保持了原有的形态结构及血凝活性。
  2.2009甲型H1N1及嵌合CTB、RTB流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究。
  通过滴鼻方式免疫小鼠,评价2009甲型H1N1及嵌合CTB、RTB流感病毒样颗粒的免疫原性。实验表明构建的三种流感病毒样颗粒, VLP、CTB-VLPs和RTB-VLPs都有良好的免疫原性,在小鼠体内诱导产生不同程度的免疫应答反应。与VLP相比,嵌合CTB的CTB-VLPs和嵌合RTB的RTB-VLPs在小鼠体内均诱导产生显著增强的体液和细胞免疫反应,特异性 IgG抗体效价提升了5~7倍。VLP诱导产生的免疫反应对同源的UI182病毒攻击能够完全保护,对异源毒FM1-6保护率为80%。而两种嵌合的病毒样颗粒CTB-VLPs和RTB-VLPs所诱导的显著增强的免疫应答对同源和异源的流感病毒均提供了100%的保护。
  3.嵌合SEA流感病毒样颗粒构建与鉴定。
  首先分别构建了表达A/Changchun/01/2009(H1N1)毒株HA、NA、M1及SEA的重组杆状病毒rpFastBac1-HA、rpFastBac1-NA、rpFastBac1-M1和rpFastBac1-SEA,共感染Sf9细胞后经Western blot和间接免疫荧光鉴定所有的蛋白成功表达,电镜观察颗粒可见具有流感病毒典型特征。再进行血凝试验发现构建的病毒样颗粒具有血凝活性,成功组装出了嵌合SEA的流感病毒样颗粒SEA-VLPs。
  4.嵌合SEA流感病毒样颗粒的小鼠实验免疫研究。
  采取肌肉注射方式对小鼠进行免疫,在免疫后第7天和第10天分别攻毒评价其保护效果。与VLP相比,嵌合SEA的SEA-VLPs在小鼠体内诱导产生显著增强的免疫反应。嵌合SEA的SEA-VLPs能够诱导机体快速产生强的免疫应答,减少了疫苗免疫应答的时间,缩短了免疫空白期。
  上述研究结果表明,分子佐剂的加入可有效提高VLP的免疫原性。其中黏膜佐剂CTB、RTB能够有效的增强体液免疫及细胞免疫,刺激产生黏膜免疫反应,提高了疫苗保护效率;而SEA则显著提升了免疫反应的速度,缩短了免疫空白期。本研究为新型流感疫苗的研制提供了技术支撑。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号