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【6h】

双峰驼MHC-DRB基因exon2克隆序列分析及遗传多样性研究

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目录

缩 略 语 表

1 引言

1.1 双峰驼的起源及发展历程

1.2 骆驼的生物学分类

1.3 内蒙古双峰驼品种资源介绍

1.4 MHC基因的发展史

1.5 MHC基因的结构和功能

1.6 MHC基因的特点及分型方法

1.7 MHC基因研究的重要性

1.8 不同物种MHC基因的研究进展

1.9 国内双峰驼的研究

1.10 MHC基因研究目的、意义

2 实验论文的技术路线

3 双峰驼MHC-DRB基因多态性分析

3.1 材料

3.2 实验方法

3.3 结果与分析

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

5 阿拉善驼和苏尼特驼遗传多样性研究

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 统计软件的使用

5.4 结果与分析

5.5 基因型的分型

5.6 Hardy-Weinberg平衡检验

5.7 DNA序列的Tajima’s检验

5.8 系统发育树的构建

6 讨论

6.1 群体遗传样本含量

6.2 双峰驼MHC-DRB基因外显子2PCR扩增结果检测

6.3 双峰驼MHC-DRB基因序列多态性

6.4 MHC基因与阿拉善双峰驼蝇蛆病的相关性

6.5 双峰驼群体遗传多样性

6.7 Hardy-Weinberg平衡检验

6.8 Tajima’sD

6.9 系统发育树

7结论

致谢

参考文献

附表Ι

作 者 简 介

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摘要

目的:本研究通过探索内蒙古阿拉善右旗、阿拉善左旗、鄂尔多斯市、巴彦淖尔市、锡林郭勒盟地区的双峰驼群体MHC-DRB基因第二外显子序列多态性;分析了阿拉善双峰驼MHC-DRB基因与阴道蝇蛆病的相关性;研究了阿拉善双峰驼和苏尼特双峰驼两个品种遗传多样性,并判断其亲缘关系,旨在为以后双峰驼的抗病育种提供重要的信息。
  方法:
  (1)对内蒙古地区121峰双峰驼MHC-DRB基因外显子2进行克隆测序,用不同分析软件进行序列分析,确定多态位点、等位基因种类、氨基酸变异位点等。
  (2)采用PCR产物直接测序的方法检测了40峰患阴道蝇蛆病的阿拉善双峰驼和54峰未患阴道蝇蛆病的阿拉善双峰驼的MHC-DRB基因第二外显子序列,并计算了患病驼和未患病驼的基因频率和基因型频率。
  (3)采用PCR产物直接测序的方法检测了72峰阿拉善双峰驼和25峰苏尼特双峰驼MHC-DRB基因外显子2序列多态性;用分析软件计算97峰双峰驼序列的遗传多样性参数值,NJ法构建两品种系统发育树。
  结果:
  (1)运用分析软件检测了121峰双峰驼DRB基因第二外显子序列,共发现了225个突变位点、213个多态位点;36种等位基因;84个氨基酸中有62个变异位点,其中包括18个假定抗原结合位点。
  (2)通过对阿拉善双峰驼中患蝇蛆病驼和健康驼序列分析,发现都由两个不同的基因控制;健康驼有三种基因型,患病驼有两种基因型。
  (3)通过软件分析了72峰阿拉善双峰驼和25峰苏尼特双峰驼序列,发现阿拉善双峰驼有三种单倍型,苏尼特双峰驼有两种单倍型。
  (4)对93和159多态位点进行哈迪-温伯格平衡检验,发现P值均小于0.05;
  (5)双峰驼MHC-DRB基因序列进行Tajima’s检验,Tajima’sD值为正值,P>0.01;
  (6)两个双峰驼品种的MHC-DRB基因外显子2序列构建系统发育树,大多数阿拉善双峰驼聚在一支,苏尼特双峰驼聚在另一支上,也有一部分两品种双峰驼混合分布在一支上。
  结论:MHC-DRB基因在五个地区双峰驼群体中具有丰富的多态性;阿拉善双峰驼中患病驼和健康驼与MHC-DRB基因有一定的相关性;阿拉善双峰驼和苏尼特双峰驼MHC-DRB基因外显子2序列都存在遗传多样性,且苏尼特双峰驼的遗传多样性高于阿拉善双峰驼;两品种双峰驼亲缘关系非常近。

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