瓜类果斑病菌多铜氧化酶基因CueO的功能研究

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摘要

缩略语表

1 前言

1．1 瓜类细菌性果斑病

1．1．1 病原菌简介

1．1．2 病害痉状与危害

1．1．3 病害的防治

1．2 细菌铜抗性研究

1．2．1 铜的生理作用

1．2．2 细菌的抗铜机制

1．3 病原细菌致病相关因子的研究

1．4 抗铜基因与致病性的研究

1．5 研究目的与意义

2 CueO基因缺失突变的筛选

2．1 实验材料

2．1．1 仪器与试剂

2．1．2 培养基

2．1．3 供试菌株和质粒

2．2 技术路线

2．3 实验方法

2．3．1 基因组提取

2．3．2 目的片段的扩增

2．3．3 目的片段回收与纯化

2．3．4 目的片段与pMD19-T Vector的连接与转化

2．3．5 pMD19-T质粒的提取

2．3．6 同源重组交换菌株的构建

2．3．7 CueO基医缺失突变菌株的筛选

2．3．8 基因CueO缺失突变体的验证

2．3．9 互补菌株的筛选

2．4 结果与分析

2．4．1 目的片段的扩增

2．4．2 自杀性重组质粒的验证

2．4．3 突变体的筛选

2．4．4 突变体的验证

2．4．5 互补菌株的验证

2．4．6 小结与讨论

3 多铜氧化酶基因CueO的功能研究

3．1 实验材料

3．1．1 仪器与试剂

3．1．2 实验菌株

3．2 实验方法

3．2．1 不同浓度硫酸铜KB平板的配制

3．2．2 Aac5、Aac5△CueO和Aac5△CueO-C硫酸铜敏感性比较

3．2．3 致病性测定

3．2．4 致敏性测定

3．2．5 生长曲线测定

3．2．6 运动性测定

3．2．7 生物膜测定

3．2．8 胞外多糖检测

3．3 结果与分析

3．3．1 致敏性测定

3．3．2 致病性测定

3．3．3 铜敏感性检测

3．3．4 对生长能力的影响

3．3．5 对生物膜的影响

3．3．6 对运动性的影响

3．3．7 对胞外多糖的影响

3．4 小结与讨论

4 全文结论与讨论

4．1 结论

4．2 讨论

致谢

参考文献

作者简介