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乌珠穆沁羊生长过程中肌纤维类型和MyHC基因变化分析

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摘要

1 引言

1.1 羊肉的基本概况

1.1.1 羊肉的营养作用

1.1.2 国内外羊肉产业的发展现状

1.2 肌纤维组织学基本概述

1.2.1 肌纤维的概述

1.2.2 肌纤维的结构

1.2.3 肌纤维的类型

1.2.4 肌纤维类型对肉品质影响

1.2.5 肌纤维类型的染色方法

1.3 肌球蛋白概述

1.3.1 肌球蛋白结构

1.3.2 骨骼肌肌球蛋白重链相关基因

1.4 乌珠穆沁羊概述

1.5 课题的国内外研究进展

1.6 主要的研究内容

1.7 研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 试验样品

2.2 试验试剂

2.3 试验设备与仪器

2.4 内容与方法

2.4.1 骨骼肌肌纤维的分型

2.4.2 肌球蛋白的提取

2.4.3 标准曲线的制作

2.4.4 肌球蛋白含量的测定

2.4.5 SDS-PAGE电泳分离肌球蛋白重链异构体

2.4.6 骨骼肌肌球蛋白重链相关基因的相对表达量

2.4.7 乌珠穆沁羊骨骼肌总RNA的提取

2.4.8 反转录

2.4.9 引物设计及合成

2.4.10 PCR条件优化

2.4.11 实时荧光定量PCR

3 结果与分析

3.1 骨骼肌肌纤维类型变化

3.1.1 骨骼肌肌纤维类型分布

3.1.2 骨骼肌肌纤维类型比例变化

3.2 骨骼肌肌球蛋白结果分析

3.2.1 肌球蛋白的含量测定结果

3.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳分离肌球蛋白重锁异构体

3.3 肌球蛋白重链相关基因结果分析

3.3.1 总RNA浓度和纯度及质量检测

3.3.2 RNA的质量评定

3.3.3 PCR产物扩增结果

3.3.4 实时荧光定量PCR

3.3.5 股二头肌实时荧光定量PCR

3.3.6 背最长肌实时荧光定量PCR

3.3.7 MyHCⅠ型基因在股二头肌和背最长肌中的相对表达量

3.3.8 MyHCⅡb型基因在股二头肌和背最长肌中的相对表达量

3.3.9 MyHCⅡa型基因在股二头肌和背最长肌中的相对表达量

3.3.10 MyHCⅡx型基因在股二头肌和背最长肌中的相对表达量

4 结论

致谢

参考文献

作者简介

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摘要

肌纤维是构成肌肉组织的基本单位,其组成与分布影响着肉品品质。在分子水平上区分不同类型肌纤维的方法是Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱx型和Ⅱb型肌纤维在骨骼肌中的有效表达。
  本论文选取的研究对象是自然放牧条件下不同生长阶段的乌珠穆沁羊股二头肌(biceps femoris,BF)和背最长肌(longissimus dorsi,LD),采用ATPase染色法对肌纤维类型进行确定并分析其变化规律。采用SDS-PAGE法对肌球蛋白重链(MyHC)异构体进行分离,利用实时荧光定量PCR技术测定肌球蛋白重链相关基因的相对表达量,分析不同类型肌纤维的变化规律与肌球蛋白重链相关基因的相对表达量变化规律之间的相关性。结果表明:
  乌珠穆沁羊1-18月龄股二头肌中大部分月龄Ⅰ和Ⅱa型基因的相对表达量总和都要高于Ⅱb型基因,这与通过ATPase组织化学染色后所得的结果基本相符。
  乌珠穆沁羊1-18月龄背最长肌中大部分月龄Ⅰ和Ⅱa型基因的相对表达量总和都要高于Ⅱb型基因。只有1、9和12月龄含有Ⅱa型肌纤维,Ⅱb型占有大部分。
  整体上,乌珠穆沁羊1-18月龄肌球蛋白重链相关基因的相对表达量与其相对应的肌纤维含量变化规律基本相符。
  本实验对不同生长阶段乌珠穆沁羊骨骼肌中肌纤维类型变化规律及肌球蛋白重链相关基因的变化特性进行研究,旨在掌握不同生长阶段肌纤维类型及肌球蛋白重链相关基因的变化规律,为改善家畜肉质和提升畜牧业产品加工奠定理论基础。

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