绵羊毛囊培养方法的建立及雌二醇对毛囊Bcl-2、Bax表达的影响

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1引言

1.1毛囊结构研究的进展

1.1.1毛囊的基本结构

1.1.2毛囊的组织发生

1.1.3毛与毛囊的周期性变化

1.1.4影响毛囊生长相关因子的研究进展

1.1.5毛囊干细胞的研究进展

1.1.6毛囊体外培养的研究现状

1.1.7毛囊的分离方法

1.1.8毛囊的培养

1.1.9毛囊体外培养主要的研究模型

1.2毛囊体外培养研究的价值及前景

1.2.1离体毛囊体外培养的应用

1.2.2离体毛囊体外培养在雄激素源性脱发治疗中的应用

1.2.3离体毛囊体外培养在痤疮治疗中的应用

1.3毛囊体外培养的研究要解决的问题

1.4毛囊细胞凋亡的研究进展

1.4.1细胞凋亡的研究

1.4.2细胞凋亡的基因调控

1.5毛囊细胞凋亡的研究现状及研究意义

1.6 PCR技术进展

1.6.1定量PCR方法研究进展

1.6.2竞争性RT-PCR方法原理

1.6.3基因组文库

1.6.4 cDNA基因文库

1.6.5 PCR法分离目的基因

1.7定量PCR

1.7.1常用的实时定量PCR方法

1.7.2影响QRTPCR的因素

1.7.3 Ct值

1.8 RT-PCR简介

1.8.1 RT-PCR引物的选择

1.8.2 RT-PCR影响因素

1.9我们开展绵羊皮肤毛囊培养的目的与意义

2实验一不同培养条件对体外培养绵羊毛囊生长的影响

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2实验药品与试剂

2.1.3仪器设备

2.2实验方法

2.2.1溶液的配置

2.2.2绵羊皮肤毛囊的分离

2.2.3 Sacpic染色

2.2.4绵羊皮肤毛囊HE染色

2.3实验结果

2.3.1培养毛囊的形态观察

2.3.2培养毛囊的组织结构观察

2.4讨论

2.4.1能挑选出完好无损健康的生长期毛囊是体外培养毛囊研究的首要问题

2.4.2绵羊皮肤毛囊培养液的选择是体外培养毛囊研究的核心问题

2.4.3绵羊皮肤毛囊培养液相关因子的加入

2.4.4绵羊皮肤毛囊培养条件的选择

2.4.5毛囊的体外生长特点的分析

2.5结论

3实验二 17-β-雌二醇对体外培养毛囊生长影响的形态学上的观察

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2仪器与主要试剂

3.2实验方法

3.2.1溶液的配置

3.2.2绵羊皮肤毛囊的分离

3.3实验结果

3.3.1培养毛囊的形态观察

3.3.2不同浓度17-β-雌二醇组与对照组之间的对比观察结果

3.4讨论

3.4.1生理状态下雌激素和实验中17--β雌二醇的浓度确定

3.4.2雌激素对毛囊和毛发生长的影响

3.4.3雄激素对毛囊和毛发生长的影响

3.5结论

4实验三蒙古绵羊皮肤毛囊Bcl-2、Bax基因表达

4.1材料与方法

4.1.1实验动物及组织

4.1.2主要仪器和试剂

4.1.3 PCR引物的设计及合成

4.1.4蒙古绵羊皮肤毛囊群总RNA的提取及检测

4.1.5 RT-PCR产物cDNA的序列测定

4.1.6序列分析

4.2结果

4.2.1蒙古绵羊皮肤毛囊总RNA的检测结果

4.2.2蒙古绵羊皮肤毛囊RT-PCR扩增结果

4.2.3蒙古绵羊皮肤毛囊PCR产物的序列分析结果

4.3讨论

4.3.1 Bcl-2、Bax的表达

4.3.2蒙古绵羊皮肤毛囊Bcl-2、Bax基因表达情况

4.3.3提取样品总RNA时注意的问题

4.4结论

5实验四实时定量PCR检测17-β-雌二醇对培养毛囊Bcl-2、Bax表达的影响

5.1材料和方法

5.1.1实验材料处理

5.1.2实验材料

5.1.3仪器及试剂

5.1.4 PCR引物的设计及合成

5.2实验设计

5.2.1 添加雌激素17-β-雌二醇

5.2.2毛囊总RNA的提取

5.2.3荧光定量RT-PCR检测培养的毛囊Bcl-2、Bax表达的定量方法

5.3结果

5.3.1荧光定量RT-PCR检测培养的毛囊Bcl-2、Bax表达定量方法的确定

5.3.2添加17-B-雌二醇对培养毛囊Bcl-2和Bax表达的影响

5.4讨论

5.4.1毛囊群的培养

5.4.2 Bcl-2的表达

5.4.3 Bax的表达

5.4.4 Bcl-2、Bax基因在毛囊中表达的意义

5.4.5 PCR反应体系的探讨

5.5结论

6全文总结

致谢

参考文献

附录

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