硫酸盐还原菌和无色硫细菌的分离纯化及鉴定

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声明

1引言

1.1硫在自然界的存在及循环

1.1.1硫的循环

1.1.2硫的微生物转化

1.2硫酸盐还原菌

1.2.1硫酸盐还原菌的分类

1.2.2硫酸盐还原菌代谢机理

1.2.3影响硫酸盐还原菌生长的因素

1.2.4硫酸盐还原菌的应用

1.3硫氧化细菌的研究现状

1.3.1硫杆菌的生物学特性

1.3.2硫杆菌的分类

1.3.3硫杆菌的代谢机理

1.4 16SrRNA序列分析

1.5研究意义

2材料和方法

2.1仪器设备及药品

2.1.1主要仪器设备

2.1.2主要实验药品

2.2实验用培养基

2.2.1 Starkey培养基

2.2.2 Postgate培养基

2.2.3排硫硫杆菌培养基

2.2.4固体培养基

2.3菌种来源

2.4菌种的筛选

2.4.1 SRB的筛选

2.4.2 CSB的筛选

2.5菌种的保藏方法

2.6菌种的形态鉴定方法

2.6.1革兰氏染色

2.6.2芽孢染色

2.6.3荚膜染色

2.6.4鞭毛染色

2.6.5细胞运动性观察

2.7菌种的生理生化特性检测方法

2.7.1 V-P试验(乙酰甲基甲醇试验)

2.7.2甲基红试验(M-R)

2.7.3吲哚试验

2.7.4糖类发酵试验

2.7.5过氧化氢酶的检测

2.7.6抗热性

2.8菌种的影响因子

2.8.1 SRB的影响因子

2.8.2 CSB的影响因子

2.9基于16SrDNA序列的菌种的分子鉴定

2.9.1菌种基因组DNA的提取

2.9.2基因组DNA检测

2.9.3 PCR扩增

2.9.4 16SrDNA序列测定

2.9.5 16SrDNA序列分析

3 SRB的结果分析

3.1 SRB的培养特征

3.2 SRB的细胞形态特征

3.3 SRB的生理生化试验结果

3.4 SRB的影响因子

3.4.1 SRB的生长曲线

3.4.2温度对SRB生长的影响

3.4.3 pH对SRB生长的影响

3.4.4 Fe2+浓度对SRB生长的影响

3.4.5盐浓度对SRB生长的影响

3.4.6接种量对SRB生长的影响

3.4.7碳源

3.4.8硫源

4 CSB的结果分析

4.1 CSB的培养特征

4.2 CSB-1的细胞形态特征

4.3 CSB-1的影响因子

4.3.1 CSB-1的生长曲线

4.3.2温度对CSB-1生长的影响

4.3.3 pH对CSB-1生长的影响

4.3.4需氧性试验

4.3.5耐热性试验

4.3.6不同硫代硫酸钠浓度对CSB-1生长的影响

4.3.7不同氮源对CSB-1生长的影响

4.3.8氮源浓度对CSB-1生长的影响

5分子鉴定结果

5.1分离菌基因组DNA的提取

5.2分离菌16SrDNA的PCR扩增结果

5.3分离菌16SrDNA序列分析

6讨论

6.1分离菌的鉴定

6.2不同方法分离纯化SRB

6.3 pH对SRB的作用

6.4碳源对SRB的作用

6.5 Fe2+对SRB的作用

6.6 pH对CSB的作用

参考文献

致谢