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调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者的影响

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引言

第一部分 调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者卵巢储备和中医证候的影响

研究方案

研究结果

讨论

参考文献

第二部分 调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者子宫内膜容受性和妊娠结局的影响

研究方案

研究结果

讨论

参考文献

结语

结论

本课题不足之处与展望

综述：卵巢低反应及相关细胞因子研究进展

攻读学位期间的研究成果

附录

致谢

声明

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摘要

卵巢低反应（poor ovarian response，POR）是卵巢对促性腺激素（gonadotropin， Gn）刺激反应不良的病理状态，主要表现为卵巢刺激周期发育的卵泡少、血雌激素的峰值低、Gn用量多、获卵数少、周期取消率高和临床妊娠率低，目前临床上缺乏有效逆转POR的合理治疗策略，是生殖领域亟待解决的难点问题。祖国医学治疗不孕不育历史悠久，能较好改善生殖内分泌功能，与现代辅助生殖技术相结合，为POR患者营造出可积极助孕的环境基础。故本课题在前期动物实验的基础上进一步探讨中药“调更益精汤”对体外受精-胚胎移植技术（in vitro fertilization and embryotransfer，IVF-ET）中肾虚血瘀型卵巢低反应患者的影响。细胞因子与生殖内分泌系统有着极其密切的关系，许多细胞因子存在于人类的卵泡液中，调节卵子的发育、成熟和排卵等过程；同时充当中介信号系统，调节子宫内膜容受性的形成。本课题即选取目前比较公认的与卵子质量及子宫内膜容受性相关的细胞因子：转化生长因子-β1（TGF-β1），白血病抑制因子（LIF），粒细胞集落刺激因子（G-CSF），血管内皮生长因子（VEGF）作为观察指标，为验证中药的有效性，选取与卵子质量相关的公认的生长分化因子-9（GDP-9），与子宫内膜容受性相关的整合素avβ3作为观察指标，研究分析调更益精汤改善卵巢储备及子宫内膜容受性的作用，初步探讨其改善妊娠结局的机制。 第一部分调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者卵巢储备和中医证候的影响 研究目的：探讨中药调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者卵巢储备的影响及对肾虚血瘀中医证候的改善，从基础状态性激素、卵泡液相关细胞因子、获卵数、受精率、优质胚胎率等方面探讨调更益精汤对低反应患者卵巢储备功能的影响，从而为中医药参与辅助生殖技术中卵巢低反应的治疗提供有效的依据。 研究方法：将上周期行微刺激方案促排卵后体外受精-胚胎移植失败的卵巢低反应患者共40例，随机分为治疗组及对照组，每组20例。两组患者均采用枸橼酸氯米氛（CC）+尿促性素（HMG）微刺激方案促排卵，治疗组从上周期胚胎移植失败月经来潮第7天即口服中药调更益精汤，共服用14天，连续治疗3个月经周期后，进入下次微刺激促排卵周期，对照组则休息3个月后进入下次微刺激促排卵周期。观察治疗组治疗前后及治疗组与对照组基础状态性激素水平、抗苗勒管激素（AMH）、窦卵泡数（AFC）、卵巢体积的变化；Elisa法检测两组患者取卵日卵泡液中GDP-9、TGF-β1、LIF、G-CSF、VEGF的表达；治疗组与对照组肾虚血瘀中医证候的变化；治疗组与对照组Gn用量、Gn天数、取卵日雌二醇（E2）、获卵数、受精率、优质胚胎率比较。 结果： 1、两组患者一般资料比较 两组患者年龄、不孕年限、体重指数、基础状态性激素比较，无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。 2、两组患者基础状态性激素、窦卵泡数、卵巢体积的比较 治疗组治疗前后及治疗组与对照组基础状态促卵泡素（FSH）、促卵泡素/黄体生成素（FSH/LH）较前下降、AMH较治疗前上升（P＜0.01），E2水平下降，窦卵泡数较前增多，治疗前后有显著性差异（P＜0.05），LH、卵巢体积治疗组与对照组无显著性差异（P＞0.05）。 3、两组患者肾虚血瘀证侯比较 治疗组疗后肾虚血瘀证候较前明显减轻（P＜0.05），且证候积分差值治疗组与对照组有显著性差异（P＜0.05）。 4、两组患者取卵日卵泡液中相关细胞因子水平比较 卵泡液中GDF-9、TGF-β1、VEGF水平，治疗组明显高于对照组，有显著性差异（P＜0.01），卵泡液中G-CSF，LIF水平，治疗组与对照组无显著性差异（P＞0.05）。 5、两组患者Gn用量、Gn用药天数、取卵日E2水平、获卵数、受精率、优质胚胎率的比较 治疗组与对照组在Gn用药天数上无显著性差异（P＞0.05），Gn用量治疗组明显低于对照组（P＜0.05），取卵日E2水平、获卵数、受精率、优质胚胎率治疗组明显高于对照组（P＜0.01）。 结论：调更益精汤可以改善卵巢低反应患者基础状态性激素水平，降低基础状态FSH、FSH/LH，E2水平，使AMH上升，窦卵泡数增多；同时可以提高卵巢低反应患者取卵日卵泡液中GDF-9、TGF-β1、VEGF的水平，改善肾虚血瘀证候，从而提高获卵数、受精率和优质胚胎率。 1、调更益精汤可以改善卵巢低反应患者的子宫内膜容受性，提高种植窗期子宫 第二部分调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者子宫内膜容受性和妊娠结局的影响 研究目的：探讨调更益精汤对IVF-ET中肾虚血瘀型卵巢低反应患者子宫内膜容受性和妊娠结局的影响，从种植窗期子宫内膜相关细胞因子的表达、子宫内膜厚度、血流指数等方面探讨调更益精汤对子宫内膜容受性的影响，从种植率、妊娠率等方面探讨调更益精汤对妊娠结局的影响，并初步探讨其可能作用机制。 研究方法：将上周期行微刺激方案促排卵后体外受精-胚胎移植失败的卵巢低反应患者共40例，随机分为治疗组及对照组，每组20例。两组患者均采用枸橼酸氯米氛（CC）+尿促性素（HMG）微刺激促排卵方案，治疗组从上周期胚胎移植失败月经来潮第7天即口服中药调更益精汤，共服用14天，连续治疗3个月经周期后，进入下次微刺激促排卵周期，对照组则休息3个月后进入下次微刺激促排卵周期。于微刺激方案取卵后5天，取少许子宫内膜组织，采用Western blot法检测两组患者种植窗期子宫内膜整合素avβ3、TGF-β1、LIF、G-CSF、VEGF蛋白的表达。比较治疗组与对照组人绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日子宫内膜厚度、A型子宫内膜比例、血流阻力和搏动指数、种植率、妊娠率的不同。 结果： 1、两组患者一般资料比较 两组患者年龄、不孕年限、体重指数、基础状态性激素比较，无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。 2、两组患者种植窗期子宫内膜相对值灰度值比较 治疗组与对照组种植窗期子宫内膜相对值灰度值，整合素avβ3、TGF-β1、VEGF蛋白表达，治疗组明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），LIF、G-CSF蛋白表达，治疗组与对照组则无显著性差异（P＞0.05）。 3、两组患者HCG日A型子宫内膜比例、子宫内膜厚度、子宫内膜血流指数的比较 治疗组与对照组HCG日A型子宫内膜比例，治疗组明显高于对照组（P＜0.05），内膜血流阻力指数（RI）、搏动指数（PI）治疗组明显低于对照组（P＜0.05）。两组患者HCG日子宫内膜厚度，差异无显著性（P＞0.05）。 4、两组患者妊娠率的比较 治疗组临床妊娠率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），种植率两组患者差异无显著性。（P＞0.05）。 结论： 1、调更益精汤可以改善卵巢低反应患者的子宫内膜容受性，提高种植窗期子宫内膜整合素avβ3、TGF-β1、VEGF蛋白的表达，改善卵巢低反应患者子宫内膜形态，降低子宫内膜的血流阻力指数和搏动指数，改善血供，利于胚胎种植，从而提高妊娠率。 2、调更益精汤能同时提高卵巢低反应患者卵泡液和子宫内膜中TGF-β1、VEGF的表达，TGF-β1作为VEGF的上游细胞因子，促进血管生成，从而改善卵子质量和子宫内膜血运。故调更益精汤提高卵巢低反应患者的妊娠率可能与提高卵泡液和子宫内膜中TGF-β1、VEGF的水平有关。

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