Dectin-1/磷脂酶Cγ信号通路在角膜上皮细胞抗真菌感染固有免疫阶段作用的研究

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目的：研究在人角膜上皮细胞抗烟曲霉菌菌丝抗原感染的固有免疫过程中，Dectin-1受体通过胞内磷脂酶Cγ（Phospholipase Cγ，PLCγ）信号传导通路产生免疫应答的作用机制。
　　方法：常规体外培养的人角膜上皮细胞（HCECs），随机分为空白对照组、真菌刺激组和通路受体阻断组，用烟曲霉菌菌丝抗原感染体外培养的HCECs，建立真菌感染的细胞模型，此为真菌刺激组，通路受体阻断组分别用U73122（PLCγ抑制剂）、Piceatannol（Syk抑制剂）及Laminarin（Dectin-1阻断剂）预处理30min，后加入烟曲霉菌菌丝抗原刺激液。应用Real time-PCR和ELISA技术方法检测不同时间点CXCL1和IL-8 mRNA和蛋白水平的表达情况。于5、15、30、45min用Western blot方法检测通路蛋白 PLCγ及脾酪氨酸激酶（spleen-tyrosine kinase，Syk）的表达情况。激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+变化。
　　结果：真菌菌丝抗原刺激HCECs后可引起CXCL1和IL-8 mRNA和蛋白水平表达升高，呈时间和浓度依赖性，时间为8h，浓度为5×106/ml时达高峰，差异有统计学意义（p<0.05）；抗原刺激后PLCγ磷酸化水平上调，30min达高峰。抑制PLCγ磷酸化能明显下调CXCL1和IL-8的表达（p<0.05）；阻断Dectin-1受体下调抗原引起的PLCγ磷酸化水平（p<0.05）。菌丝刺激 HCECs可明显增强胞内 Ca2+释放，U73122和Laminarin预处理后的胞内Ca2+释放相比菌丝刺激组明显降低（p<0.05）。菌丝刺激引起Syk磷酸化水平上调，阻断Dectin-1受体能下调Syk的活化（p<0.05）。Syk的抑制也可以使PLCγ的磷酸化水平下调（p<0.05）。
　　结论： PLCγ作为Dectin-1的下游分子参与角膜上皮细胞抗真菌感染。烟曲霉菌菌丝抗原刺激人角膜上皮细胞可明显增强胞内Ca2+的释放，Dectin-1/PLCγ信号通路参与固有免疫阶段胞内Ca2+的释放。Syk作为Dectin-1通路中的下游蛋白参与调节PLCγ的活化。

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作者
彭旭东;
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作者单位

青岛大学;

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授予单位青岛大学;
学科眼科学
授予学位硕士
导师姓名赵桂秋;
年度 2015
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类角膜疾病;病理生理学;
关键词
角膜上皮细胞; Dectin-1受体; Cγ磷脂酶; 信号通路; 免疫应答;

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