RKIP基因表达上调对宫颈癌细胞生物学行为的影响

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目的:探讨RKIP基因表达上调对宫颈癌细胞生物学行为的影响。
　　方法:(1)应用脂质体转染法将含有正义(sense，ss) RKIP cDNA的真核表达载体转染入宫颈癌Caski细胞，并设置未转染的Caski细胞和空质粒转染细胞作为对照，G418浓度梯度筛选实验，使用最佳筛选浓度的G418筛选阳性克隆。(2) G418维持浓度扩大培养建立RKIP基因表达上调的稳定转染细胞(pcDNA3.1(+)-ssRKIP）。(3)应用Western-blot（蛋白印记法）检测RKIP基因转染前后人宫颈癌Caski细胞Raf激酶抑制蛋白的表达水平。(4)应用体外增殖实验(MTT法)、双层软琼脂集落形成实验、Transwell侵袭小室实验等观察RKIP基因对人宫颈癌Caski细胞体外增殖、侵袭及转移能力等生物学行为的影响。
　　结果:(1)通过脂质体转染法将含有目的基因RKIP及空白质粒分别转染入人宫颈癌Caski细胞，成功构建RKIP基因表达上调的人宫颈癌Caski细胞株（ssRKIP细胞），以及对应的空白质粒细胞株(pcDNA3.1(+)细胞）。(2) Western-blot法检测RKIP基因在转染前后细胞中的表达，ssRKIP细胞的RKIP蛋白表达水平上调，pcDNA3.1(+)细胞及未转染Caski细胞的RKIP蛋白表达则无明显差异。(3)体外增殖能力:ssRKIP细胞的体外增殖能力明显低于未转染Caski细胞，差异有统计学意义(P＜0.01)。(4)锚定非依赖性生长能力:ssRKIP细胞（克隆形成数112.78±5.60）与其对照组未转染Caski细胞（克隆形成数151.55±6.14）相比明显减少，差异有统计学意义(t=8.137，P＜0.01);而对照组未转染Caski细胞的克隆形成数(151.55±6.14)与pcDNA3.1(+)转染细胞(159.11±3.64)比较，差异无统计学意义(t=3.8，P＞0.05)。(5)体外侵袭能力:ssRKIP细胞[穿膜细胞数为(54.33±4.12)]明显低于未转染细胞[穿膜细胞数为(80±3.20)]，差异有统计学意义(t=9.25， P＜0.01)。
　　结论:(1)过表达RKIP基因对宫颈癌Caski细胞株的体外增殖、侵袭转移能力等生物学行为具有抑制作用。(2) RKIP基因可能是宫颈癌细胞的转移抑制基因，也可能是其抑癌基因。

著录项

作者
吕庆凤;
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作者单位

青岛大学;

展开▼
授予单位青岛大学;
学科妇产科学
授予学位硕士
导师姓名纪新强;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类子宫肿瘤;
关键词
宫颈肿瘤; 细胞增殖; 磷脂酰乙醇胺结合蛋白; 生物学行为;

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