腺相关病毒介导的hTGFβ1和hVEGF双基因联合体内转染阻逆羊椎间盘退变的生物学效应

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目的：建立羊椎间盘退变模型；应用腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)介导人转化生长因子β<,1>(human transforming growth factor-β<,1>，hTGF-β<,1>)和人血管内皮生长因子(human vascular endothelial growth factor，hVEGF)基因体内转染羊退变椎间盘，观察AAV-hTGF-β<,1>和hVEGF的表达以及单基因转染和双基因联合转染对退变椎间盘的生物学作用。方法：成年SPF(specific pathogen flee，SPF)级去势山羊，通过11号刀片损伤椎间盘前外侧纤维环的方法建立椎间盘退变模型，造模后4、8、12、24周分别进行影像学和组织学检测，观察造模椎间盘变化。将造模成功动物随机分为A、B、C、D和E 5组，各组分别于造模椎间盘内注射50μL试剂：A组rAAV2-hTGFβ<,1>、B组rAAV2-hVEGF、C组rAAV2-hTGF β<,1>+rAAV2-hVEGF、D组磷酸盐缓冲液(PBS)、E组rAAV2-EGFP(enhanced green fluorescent protein，EGFP)。转染后2、4、8、12周时分别进行影像学、组织学和生物化学检测。结果： (1)影像学和组织学检测结果表明造模动物椎间盘发生缓慢、可靠的退行性变。 (2)基因转染后椎间盘的变化 ①影像学检测：A组、C组动物椎问盘高度指数(disc height index，DHI)均高于D组，C组更显著，差别有统计学意义；B组与D组无显著性差异。 ②组织学检测：HE、Safranine 0染色后观察到A组、C组动物椎间盘细胞数目减少量、结构紊乱程度、髓核纤维环界限模糊程度等均低于D组。B组与D组无显著性差异。免疫组化染色后观察到：A组、C组动物椎间盘髓核中Ⅱ胶原含量下降程度、纤维环中Ⅰ胶原含量下降程度均低于D组，C组更显著，差别有统计学意义，B组与D组无显著性差异；转染两周后，A组、B组和C组的rAAV2-hTGF β<,1>、rAAV2-hVEGF和rAAV2-hTGF β<,1>+rAAV2-hVEGF较D组显著增多；E组动物转染后12周仍可观察到EGFP的表达。 ③生物化学检测：A组、C组动物椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量下降程度均低于D组，C组更显著，差别有统计学意义；B组与D组无显著性差异。结论： (1)本方法可以成功建立一种椎间盘退变动物模型； (2)rAAV2-hTGFβ<,1>和rAAV2-hVEGF转染退变的椎间盘后，可持续表达12周； (3)hTGF β<,1>转染可在一定程度上逆转椎间盘退变； (4)hVEGF可协同hTGFβ<,1>逆转椎间盘退变； (5)hTGFβ<,1>和hVEGF共转染具有协同效应。

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作者
胡鹏;
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作者单位

青岛大学;

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授予单位青岛大学;
学科外科学(骨外科)
授予学位硕士
导师姓名胡有谷;
年度 2007
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类脊柱及背疾病;
关键词
椎间盘; 动物模型; 腺相关病毒; 转化生长因子; hTGF-β1; 血管内皮生长因子; 转染; 基因治疗;

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