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精子形态对接受辅助生殖技术患者妊娠结局影响的研究

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摘要

符号说明

前言

第一部分 精子形态对接受辅助生殖技术患者新鲜周期妊娠结局的影响

1．研究资料和分组

2．主要仪器设备及试剂耗材

3．方法

研究结果

1．各组患者一般资料的比较

2．各组患者实验室指标的比较

3．各组的妊娠结局相关指标比较

4．各组卵裂期胚胎移植与囊胚移植妊娠结局相关指标比较

第二部分 精子形态对接受辅助生殖技术患者冷冻复苏周期妊娠结局的影响

1．研究资料和分组

2．主要仪器设备及试剂耗材

3．方法

研究结果

1．各组患者的一般资料比较

2．各组患者的妊娠结局比较

3．各组患者复苏胚胎移植与复苏囊胚移植的妊娠结局比较

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文目录

学位论文评阅及答辩情况表

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摘要

近年来，由于社会经济的发展、人们的生活环境、饮食等习惯的改变，我国“二孩”政策的全面放开，不孕症的发病率也在逐年上升。据统计，15％的夫妻在1年内无法怀孕并就医，不孕症的夫妇中约有50％男性有精子形态不正常的问题。精子形态是精子质量评价的一项重要指标，畸形精子会影响受精率和胚胎发育的潜能，并带来不良妊娠结局，已经成为影响男性生殖健康的主要问题之一。从1980年开始到2010年为止，世界卫生组织(WHO)前后共推出了五版《人类精液检查与处理实验室手册》，其中精子正常形态比率的诊断标准一直在改变。第五版中提出的4％这一正常精子形态临界值，规定只要是正常精子形态低于4％，就可以诊断为畸形精子症。判定标准从第四版的15％降到了4％，新修订的这一改变让很多的男科医生及检验室的技师一时间难以适应，这也给备孕的夫妻带来了很大的困扰。第5版手册中精子正常形态率降低幅度如此大，是否会使受精率下降，如果只依靠精子的形态学这一独立指标，能否对最终的妊娠结局造成影响还存在着争议。更重要的是，第5版的《WHO人类精液检查与处理实验室手册》中没有中国男性的数据统计和资料。那么第5版精子形态学的修订，对中国这一人口众多国家的男性是否同样适用，引起很多专家的探讨。经过体外培养至囊胚期胚胎再进行移植，筛选发育潜力好的胚胎，是否可以降低畸精子症对妊娠结局的影响尚无定论。 患者在进行助孕过程中，除了在本次治疗中能够顺利进行新鲜周期移植外，还有一部分患者因为各类原因不适合移植，需要把胚胎进行冷冻保存，再行冻融胚胎复苏移植。为更好的研究精子形态对妊娠结局的影响，我们将分两部分来进行探讨，第一部分为精子形态对接受辅助生殖技术患者新鲜周期妊娠结局的影响，第二部分为精子形态对复苏周期妊娠结局的影响，进而为临床工作提供循证依据，合理选择受精方式，为患者减少不必要支出。 第一部分:精子形态对接受辅助技术患者新鲜周期妊娠结局的影响 目的： 1.本研究按照第5版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》标准来探讨精子形态对接受辅助生殖技术患者妊娠结局的预测价值，包括正常形态及畸精子症患者采用不同受精方式后对新鲜周期移植的受精率、优质胚胎率、临床妊娠、流产率等，以及胚胎移植和囊胚移植后妊娠结局的比较;2.探讨精子形态是否对常规的辅助生殖技术有预测作用和评估价值，是否可将其作为受精方式选择的依据，为临床提供循证依据及指导。 方法： 本研究回顾性分析了山东省某三级甲等综合医院2015年1月-2017年12月期间在生殖中心实施辅助生殖技术的患者，符合入选条件者共1277个周期。所有接受试管婴儿助孕的男性患者需禁欲3～7天，手淫法取精，精液需完整取入无菌取精杯内，在37度水浴箱中放置半小时，液化后进行基本精液分析，使用原液涂片，采用Diff-Quik快速染色法染色，在显微镜下查看染色后的精子涂片，需要不间断计数不少于200个精子，计数所有正常的和异常的精子缺陷。依据第5版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》的标准及操作程序，阅片采用人工计数的方法。依据4％做为正常精子形态临界值，＜4％即诊断为畸精子症。按助孕患者采取不同的受精方式（IVF或ICSI）分为四组:IVF正常组（采取体外受精并且正常精子形态≥4％）、IVF畸形组（采取体外受精但正常精子形态＜4％）、ICSI正常组（采取卵泡浆内单精子注射为受精方式且正常精子形态≥4％）、ICSI畸形组（采取卵泡浆内单精子注射为受精方式但正常精子形态＜4％）。比较这四组间的基本资料、平均获卵数、2PN（两原核）受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、流产率、分娩率等。并比较四组间新鲜周期移植卵裂期胚胎及移植囊胚的血HCG阳性率、临床妊娠率及流产率等妊娠结局。 结果： (1)四组患者的平均获卵数、成熟卵子数、优质胚胎率均无显著差异(P＞0.05)，但是2PN受精率和2PN卵裂率有显著差异(P＜0.05)，其中ICSI组的2PN受精率显著高于IVF组(P＜0.05)，精子形态正常组的2PN卵裂率显著高于精子形态畸形组(P＜0.05)。 (2)四组患者的血HCG阳性率，男女婴分娩率均有显著差异(P＜0.05)，其中畸形精子组患者的血HCG阳性率高于精子形态正常组患者(P＜0.05)，并且畸形精子组患者的临床妊娠率也高于精子形态正常组的患者(P＜0.05)。 (3)畸形精子组患者的女婴分娩率高于精子形态正常组患者。但是四组患者的临床妊娠率、流产率、多胎妊娠率、异位妊娠率、分娩率以及平均分娩孕周以及移植胚胎和移植囊胚的妊娠结局均无显著差异(P＞0.05)。 结论： 畸形精子症患者与精子正常形态者相比较，行常规体外受精-胚胎移植治疗时不受精的风险更高，卵泡浆内单精子注射可以提高畸形精子症患者的正常受精率。依据精子的形态来预测妊娠的结局具有一定的局限性。虽然畸精子症患者培养至囊胚筛选发育潜能好的胚胎，但是并不能显著改善妊娠结局。 第二部分:精子形态对接受辅助生殖技术患者冷冻复苏周期妊娠结局的影响 目的： 比较畸形精子症与正常形态精子患者在冷冻胚胎复苏移植周期中，卵裂期胚胎移植与复苏囊胚移植后的临床妊娠率、流产率等妊娠结局指标，探讨精子形态在复苏周期中对妊娠结局的影响。 方法： 回顾性分析2015年1月-2017年12月期间，于山东省某三级甲等综合医院生殖中心行冷冻胚胎复苏移植者共318个周期，为减少女方因素的影响，纳入标准选择女方均为原发不孕，并且冷冻胚胎复苏周期中未使用过促排卵药物，均为自然周期者，依据新鲜周期的不同受精方式按第5版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》共分四组:IVF正常组(新鲜周期采取体外受精并且正常精子形态≥4％)、IVF畸形组（新鲜周期采取体外受精但正常精子形态＜4％）、ICSI正常组（新鲜周期采取卵泡浆内单精子注射为受精方式并且正常精子形态≥4％）、ICSI畸形组（新鲜周期采取卵泡浆内单精子注射为受精方式但正常精子形态＜4％）。比较这四组间的基本资料、临床妊娠率、流产率、分娩率等妊娠结局。并将每组按冷冻胚胎的不同属性分为冻融胚胎解冻周期和冻融囊胚解冻周期，比较四组间复苏移植卵裂期胚胎和复苏囊胚的血HCG阳性率、临床妊娠率及流产率等妊娠结局。 结果： (1)四组的临床妊娠率、流产率、多胎妊娠率、异位妊娠率、分娩率及平均分娩孕周均无统计学差异(P＞0.05)，但是IVF精子形态正常组和ICSI精子畸形组的患者，复苏囊胚移植组的血HCG阳性率和临床妊娠率显著高于复苏胚胎移植组(P＜0.05)。 (2) IVF精子形态正常组复苏囊胚移植的多胎妊娠率显著低于复苏胚胎移植(P＜0.05)。 结论： 畸精子症患者通过实施IVF及ICSI所得的优质胚胎或囊胚经过冷冻后复苏移植与正常精子形态者相比其妊娠结局无显著差异。在复苏周期中，畸精子症患者采取ICSI后将胚胎培养至囊胚可以筛选移植发育潜能好的胚胎可改善其妊娠结局。

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