基于限制性内切酶构建的荧光生物传感器用于转录因子检测

声明

摘要

符号与缩写

第一章 绪论

1．1 转录因子

1．1．1 转录因子的检测意义

1．1．2 TF的传统检测方法

1．1．3 TF的荧光检测方法

1．2 酶催化的等温信号扩增方法

1．2．1 内切酶催化的等温信号扩增方法

1．2．2 外切酶催化的等温信号扩增方法

1．2．3 聚合酶催化的等温信号扩增方法

1．3 本论文的研究目的和研究内容

1．3．1 研究目的

1．3．2 研究内容

参考文献

第二章 Fok Ⅰ切割-抑制策略用于转录因子的特异性及准确性检测

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 仪器

2．2．2 材料与试剂

2．3 实验步骤

2．3．1 双链DNA探针的制备

2．3．2 NF-κB p50-DNA结合及Fok Ⅰ酶切

2．3．3 冬凌草素的抑制作用

2．3．4 荧光测定

2．3．5 凝胶电泳成像

2．3．6 HeLa细胞裂解液的制备

2．4 结果与讨论

2．4．1 凝胶电泳表征

2．4．2 荧光光谱验证实验可行性

2．4．3 实验条件优化

2．4．4 目标物NF-κB p50的定量检测

2．4．5 特异性考察

2．4．6 精密度和重现性考察

2．4．7 目标物NF-κB p50的复杂介质检测

2．4．8 冬凌草素的抑制作用

2．4．9 实际样品分析

2．5 结论

参考文献

第三章 蛋白质结合-抑制作用为基础的DNA组装及滚环扩增用于转录因子的灵敏检测

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 仪器

3．2．2 材料与试剂

3．3 实验步骤

3．3．1 双链探针S1-S2的制备

3．3．2 NF-κB p50-DNA结合及A1wI信号转导

3．3．3 DNA三向结诱导滚环扩增

3．3．4 荧光测定

3．3．5 凝胶电泳成像

3．4 结果与讨论

3．4．1 探针S1-S2合成及A1wI酶切电泳表征

3．4．2 荧光光谱验证实验可行性

3．4．3 滚环模板杂交方式优化

3．5 结论

参考文献

致谢

硕士期间发表论文