蓝藻光合作用捕光色素蛋白复合物-藻胆体的组装机制及功能调节

声明

摘要

符号说明

第一章 研究背景与立题依据

1．1 藻胆体

1．1．1 藻胆体的结构

1．1．2 藻胆体的主要组分——藻胆蛋白

1．1．3 藻胆蛋白中的色素基团——藻胆素

1．1．4 藻胆体的重要组分——连接蛋白

1．1．5 藻胆体的能量传递

1．1．6 藻胆体的分子结构

1．1．7 藻胆体在类羹体裹面的排布

1．2 藻胆体的荧光动力学

1．2．1 光漂白后荧光恢复技术

1．2．2 蓝藻和红藻藻胆体的荧光动力学研究

1．3 蛋白质问的相互作用

1．3．1 蛋白质相互作用的特点

1．3．2 蛋白质相互作用的研究方法简介

1．4 立题依据与研究内容

1．4．1 立题依据

1．4．2 研究内容

第二章 单细胞蓝藻的FRAP研究

2．1 引言

2．2 材料和方法

2．2．1 菌株与质粒

2．2．2 主要试剂和试剂盒

2．2．3 主要仪器设备

2．2．4 培养基的配制

2．2．5 藻株的培养

2．2．6 藻胆体及藻胆体-类囊体膜的提取

2．2．7 FRAP样品的制备

2．2．8 FRAP实验

2．2．9 FRAP实验的数据处理

2．3 结果与分析

2．3．1 天然状态下蓝藻细胞的荧光恢复

2．3．2 戊二醛固定后蓝藻细胞的荧光恢复

2．3．3 离体藻胆体和藻胆体-类囊体膜的荧光恢复

2．3．4 FRAP实验的定量分析

2．4 讨论

第三章 丝状蓝藻的FRAP研究

3．1 引言

3．2 材料和方法

3．2．1 菌株与质粒

3．2．2 主要试剂和试剂盒

3．2．3 主要仪器设备

3．2．4 培养基的配制

3．2．5 藻株的培养

3．2．6 全细胞悬液的吸收光谱检测

3．2．7 藻胆体及藻胆体-类囊体膜的提取

3．2．8 FRAP样品的制备

3．2．9 FRAP实验

3．2．10 FRAP数据处理

3．3 结果与分析

3．3．1 两株丝状蓝藻的藻胆蛋白组成分析

3．3．2 天然状态下蓝藻藻丝的荧光恢复

3．3．3 戊二醛固定后蓝藻藻丝的荧光恢复

3．3．4 离体藻胆体和藻胆体-类囊体膜的荧光恢复

3．3．5 FRAP实验的定量分析

3．4 讨论

第四章 蓝藻pfam00427结构域与藻胆蛋白的相互作用研究

4．1 引言

4．2 材料与方法

4．2．1 菌株与质粒

4．2．2 主要试剂和试剂盒

4．2．3 主要仪器设备

4．2．4 培养基

4．2．5 数据库及分析软件

4．2．6 藻株与菌株的培养

4．2．7 C-PC(αβ)单体的纯化

4．2．8 GST-pfam00427突变体的构建

4．2．9 GST-pfam00427突变体的分离纯化

4．2．10 GST pull-down研究pfam00427结构域同C-PC之间的相互作用

4．3 结果与分析

4．3．1 pfam00427-C-PC(αβ)6七聚体对接模型

4．3．2 GST pull-down方法检测pfam00427结构域与C-PC的相互作用

4．3．3 pfam00427-C-PC(αβ)6七聚体的最终模型及实验验证

4．3．4 藻胆体杆结构的精细组装模型

4．4 讨论

第五章 蓝藻pfam00502结构域的结晶及优化

5．1 引言

5．2 材料与方法

5．2．1 表达质粒和菌株

5．2．2 主要试剂和试剂盒

5．2．3 主要仪器设备与耗材

5．2．4 培养基

5．2．5 数据库及分析软件

5．2．6 apo-pfam00502蛋白的表达及纯化

5．2．7 PCB表达质粒的构建

5．2．8 PCB-pfam00502蛋白的重组及纯化

5．2．9 PCB-pfam00502蛋白的Zn2+电泳检测

5．2．10 蛋白晶体的培养及优化

5．3 结果与分析

5．3．1 apo-pfam00502的表达和纯化

5．3．2 apo-pfam00502蛋白的结晶

5．3．3 PCB-pfam00502蛋白的重组和纯化

5．3．4 PCB-pfam00502蛋白的结晶

5．4 讨论

全文总结与课题展望

参考文献

在读期间论文发表以及获奖情况

致谢