嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫加双氧酶的鉴定及其在硫氧化代谢中的作用研究

声明

摘要

第一章 研究背景综述

1．1 生物冶金

1．1．1 生物冶金技术简介

1．1．2 浸矿用微生物

1．1．3 硫化矿微生物浸出机理

1．2 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌简介

1．2．1 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌生理特征

1．2．2 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌代谢机制

1．2．3 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌遗传操作系统

1．3 微生物元素硫氧化机制

1．3．1 兼性化能自养细菌中元素硫代谢机制

1．3．2 化能自养硫氧化古菌中元素硫代谢机制

1．3．3 专性化能自养细菌中元素硫代谢机制

1．4 本论文的研究目的和研究内容

第二章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌S0氧化关键酶基因sdo的鉴定及分析

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 菌株和质粒

2．2．2 培养基和培养条件

2．2．3 试剂和仪器

2．2．4 实验方法

2．3 结果和讨论

2．3．1 ETHE1蛋白序列与At.? ATCC 23270基因组的比对

2．3．2 重组质粒pET-22b(+)-sdo和pET-22b(+)-2644的构建

2．3．3 SDO蛋白的诱导表达

2．3．4 硫加双氧酶(SDO)的酶活测定

2．4 小结

第三章 重组硫加双氧酶蛋白在大肠杆菌中的酶学性质研究

3．1 引言

3．2 材料和方法

3．2．1 菌株和质粒

3．2．2 培养基和培养条件

3．2．3 试剂和仪器

3．2．4 实验方法

3．3 结果和讨论

3．3．1 硫加双氧酶蛋白的纯化及超滤

3．3．2 重组硫加双氧酶最适反映温度检测

3．3．3 重组硫加双氧酶最适作用pH值检测

3．3．4 重组硫加双氧酶抑制实验的研究

3．4 小结

第四章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫加双氧酶基因的表达研究

4．1 引言

4．2 材料和方法

4．2．1 菌株和质粒

4．2．2 培养基和培养条件

4．2．3 试剂和仪器

4．2．4 实验方法

4．3 结果和讨论

4．3．1 Western-blotting检测sdo基因在At.?中的表达

4．3．2 不同底物条件下At.?硫加双氧酶活性检测

4．3．3 qRT-PCR检测比较以Fe2+和S0为能源时At.?硫氧化相关基因表达差异

4．4 小结

第五章 质粒上携带硫加双氧酶基因在嗜酸性氧化亚铁硫杆菌中的表达

5．1 引言

5．2 材料和方法

5．2．1 菌株和质粒

5．2．2 培养基和培养条件

5．2．3 试剂和仪器

5．2．4 实验方法

5．3 结果和讨论

5．3．1 重组质粒pJRD215-psdo的构建

5．3．2 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌工程菌At.? ATCC 23270(pJRD215-psdo)的构建

5．3．3 qRT-PCR检测工程菌At.?(pJRD215-psdo)硫氧化基因的表达

5．3．4 工程菌At.?(pJRD215-psdo)生长曲线的测定

5．4 小结

第六章 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌硫加双氧酶基因的敲除

6．1 引言

6．2 材料和方法

6．2．1 菌株和质粒

6．2．2 培养基和培养条件

6．2．3 试剂和仪器

6．2．4 实验方法

6．3 结果和讨论

6．3．1 自杀质粒pKIT-Ksdo的构建

6．3．2 sdo基因的敲除

6．4 小结

总结与展望

参考文献

致谢

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