束缚应激通过TNF-α信号通路影响小鼠精子和精子发生

声明

前言

1.1 应激和应激模型

1.1.1 应激的概念

1.1.2 心理应激模型

1.2 应激对雄性动物生殖的影响

1.2.1 应激与雄性生殖相关激素

1.2.2 应激对睾丸体细胞的影响

1.2.3 应激对精子发生的影响

1.2.4 应激对精子的影响

1.2.5 应激对细胞器功能的影响

1.3 细胞凋亡

1.3.1 细胞凋亡的概念及生理意义

1.3.2 Caspase相关生物学概念

1.3.3 精子发生过程中的细胞凋亡

1.4 TNF-α信号通路

1.4.1 TNF-α和TNFR基本概念

1.4.2 TNF-α介导的信号传导通路

2 材料与方法

2.1 实验动物及应激模型

2.2 仪器设备

2.3 主要试剂

2.4 体外受精

2.5 精子线粒体JC-1染色

2.5.1 线粒体JC-1染色原理

2.5.2 线粒体JC-1染色试剂

2.5.3 线粒体JC-1染色注意事项

2.5.4 线粒体JC-1染色操作步骤

2.6 精子MDA含量检测

2.6.1 MDA检测原理

2.6.2 试剂组成与配制

2.6.3 注意事项

2.6.4 操作步骤

2.7 蛋白质杂交（Western Blot）

2.7.1 Western blot 样品制备

2.7.2 Western blot 试剂及溶液

2.7.3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.7.4 抗原抗体的结合及显色

2.8 RT-PCR

2.8.1 RT-PCR实验原理

2.8.2 样品制备与总RNA提取

2.8.3 反转录生成cDNA

2.9 TUNEL 细胞凋亡检测

2.9.1 TUNEL 细胞凋亡检测原理

2.9.2 TUNEL 细胞凋亡检测试剂及溶液

2.9.3 睾丸切片TUNEL 细胞凋亡染色

2.10 数据分析

3 结果与分析

3.1 束缚应激公鼠对精子体外受精能力的影响

3.2 精子MDA含量的变化

3.3 精子线粒体膜电位的变化

3.4精子Caspase-3表达检测

3.5 精子TNF-αmRNA表达

3.6 精子中TNFR1蛋白的表达

3.7 生精小管中Caspase-3的表达

3.8 生精小管TNF-αmRNA 表达

3.9 生精小管TNFR1 mRNA 表达

3.10 生精小管中TNFR1蛋白的表达

3.11睾丸组织切片TUNEL细胞凋亡检测

3.12 束缚应激C57和TNF-α-/-公鼠对精子体外受精能力的影响

3.13 束缚应激C57和TNF-α-/-公鼠生精小管中Caspase-3的表达

4 讨论

4.1 束缚应激模型的建立及有效性的确定

4.2 束缚应激加剧生殖细胞的凋亡

4.3 束缚应激对精子发生的影响

4.4 束缚应激过程中TNF-α信号通路参与精子发生

4.5精子RNA的提取

5 结论

参考文献

致谢