嗜热革节孢第一家族和第六家族糖苷水解酶的分子改造

声明

英文缩略词及中文对照表

1前言

1.1纤维素概述

1.2纤维素酶概述

1.2.1按组成和功能

1.2.2按降解机理

1.3嗜热真菌概述

1.4纤维素酶的研究

1.4.1酶的定向进化

1.4.2纤维素酶的定点突变

1.5β-葡萄糖苷酶酶活力与葡萄糖耐受性研究

1.5.1β-葡萄糖苷酶酶活力的研究

1.5.2 糖苷水解酶第一家族β-葡萄糖苷酶葡萄糖耐受性的研究

1.6立题依据

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1菌株和感受态

2.1.2 酶、生化试剂和试剂盒

2.1.3 溶液及培养基配制

2.2 实验方法

2.2.1嗜热革节孢外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶野生型基因的真核表达

2.2.2 BGK及CBHK突变基因的真核表达

2.2.3纯化产物的性质检测

2.2.4三维结构模拟及分析

3 结果与分析

3.1β-葡萄糖苷酶bgk基因和外切葡聚糖酶cbhk基因的真核表达

3.1.1 bgk基因和cbhk基因的克隆与序列分析

3.1.2β-葡萄糖苷酶BGK和外切葡聚糖酶CBHK酵母工程菌的获得

3.1.3外切葡聚糖酶CBHK和β-葡萄糖苷酶BGK工程菌的诱导表达与纯化

3.2 BGK和CBHK突变基因的真核表达

3.2.1 cbhk突变基因和bgk突变基因的获得

3.2.2突变体酵母工程菌的获得

3.2.3突变体的诱导表达与纯化

3.3纯化产物的性质测定

3.3.1外切葡聚糖酶CBHK野生酶及突变酶的酶活力测定

3.3.2β-葡萄糖苷酶BGK野生酶及突变酶的酶活力测定

3.3.3β-葡萄糖苷酶BGK野生酶及突变酶动力学常数测定

3.3.4β-葡萄糖苷酶BGK野生酶及突变酶的葡萄糖耐受性测定

3.3.5 BGK及突变酶的结构比较

4讨论

4.1 纤维素酶的分子改造

4.2 酶的活性测定

4.3β-葡萄糖苷酶葡萄糖耐受性的测定

5 结论

参考文献

致谢