细粒棘球蚴重组抗原14-3-3和苹果酸脱氢酶诱导宿主DC-CD4+T细胞免疫应答机制的研究

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的：通过比较不同免疫保护力的细粒棘球蚴重组抗原14-3-3（rEg14-3-3）和线粒体苹果酸脱氢酶（rEgmMDH）对宿主树突状细胞（dendritic cell，DC）的成熟、DC细胞递呈并促进CD4+T细胞活化、分化及效应的影响，研究细粒棘球蚴抗原所诱导的宿主免疫应答机制。
　　方法：1.抗原的获取：①重组抗原的表达：通过原核表达以及亲和层析纯化获得细粒棘球蚴重组抗原rEg14-3-3和rEgmMDH，并复性获取可溶性蛋白rEgmMDH；②天然粗抗原的制备：外科手术剥离细粒棘球蚴病人的包囊并无菌收集囊液和分离原头蚴，原头蚴经液氮研磨和超声破碎获取可溶性抗原。
　　2.小鼠骨髓来源的DC（BMDC）的制备和培养：无菌分离小鼠骨髓细胞，通过GM-CSF、IL-4定向培养7天，获取未成熟DC。
　　3.不同抗原刺激BMDC的扫描电镜及流式细胞术检测：LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、原头蚴粗抗原和囊液分别刺激未成熟BMDC48小时，扫描电镜观察各组BMDC表面形态特征，流式细胞术检测各组 BMDC的表面分子（MHCⅡ、CD40、CD80和CD86）和极化因子（IL-12和CCL2）的表达水平。
　　4.混合淋巴细胞反应（MLR）及流式细胞术检测：无菌分离正常小鼠脾脏单个淋巴细胞，通过磁珠分选分离纯化小鼠脾脏初始CD4+T细胞。LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、原头蚴粗抗原和囊液刺激培养的BMDC分别与初始CD4+T细胞按1:5的比例混合培养5天。流式细胞术检测混合淋巴细胞反应（MLR）后Th1，Th2，Th17和Treg细胞占CD4+T细胞的比例。
　　结果：1.获得高纯度的可溶性重组抗原rEg14-3-3和rEgmMDH，以及无菌的囊液抗原和原头蚴可溶性抗原。
　　2.①扫描电镜观察结果显示LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、SPA和HF抗原刺激的DC细胞均有部分分化为具有树突状突起的DC。②流式细胞术检测各组抗原刺激BMDC的结果显示，与PBS相比，相应浓度的LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、原头蚴可溶性抗原和囊液均能刺激BMDC高表达MHCⅡ类分子和CD40（P＜0.05）。与PBS相比，BMDC在相应浓度的LPS、rEg14-3-3、原头蚴可溶性抗原刺激后，可高表达CD80和CD86（P＜0.05），而相应浓度的rEgmMDH刺激的BMDC低表达CD80（P＞0.05），相应浓度的囊液刺激的BMDC低表达CD86（P＞0.05）。③比较分析rEg14-3-3组和rEgmMDH组 BMDC表面分子的表达水平，经抗原rEg14-3-3刺激后的BMDC较高水平表达MHCⅡ类分子、CD80和CD86（P＜0.05）。④相应浓度的LPS和rEgmMDH能刺激DC表达较高水平的极化因子IL-12（P＜0.05），相应浓度的rEg14-3-3和囊液能刺激DC表达较高水平的极化因子CCL2（P＜0.05）。
　　3.流式细胞术分析混合淋巴细胞反应后的CD4+T细胞，结果显示，①与PBS相比，LPS、rEg14-3-3和rEgmMDH能诱导初始CD4+T细胞分化较高水平的CD3+CD4+IFN-γ+T细胞（P＜0.05），而且比较rEg14-3-3和rEgmMDH组CD3+CD4+IFN-γ+T细胞的分化水平，无统计学差异（P＞0.05）；② rEg14-3-3、囊液抗原能诱导初始CD4+T细胞分化较高水平的CD3+CD4+IL-4+T细胞（P＜0.05）；③rEgmMDH能诱导初始CD4+T细胞显著分化高水平的CD3+CD4+IL-17+T细胞（P＜0.05）；④LPS、rEgmMDH、原头蚴可溶性抗原能诱导初始CD4+T细胞分化较高水平的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞（P＜0.05）。
　　结论：1.与未获得免疫保护力的抗原rEgmMDH相比，抗原rEg14-3-3更容易诱导DC成熟。
　　2.体外实验显示rEg14-3-3负载DC后优势诱导初始CD4+T细胞活化为高水平的Th1、Th2细胞亚群，rEgmMDH负载 DC后优势诱导初始CD4+T细胞活化为高水平的Th1、Th17、Treg细胞亚群。具有不同免疫保护力的抗原可能通过DC诱导CD4+T细胞分别向不同的方向分化，从而发挥抗感染作用。

著录项

作者
王玉姣;
展开▼
作者单位

宁夏医科大学;

展开▼
授予单位宁夏医科大学;
学科遗传学
授予学位硕士
导师姓名赵巍;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫遗传学;
关键词
细粒棘球蚴重组抗原; 苹果酸脱氢酶诱导宿主; CD4+T细胞; 免疫应答;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 细粒棘球蚴14-3-3重组抗原诱导小鼠体液免疫应答的研究 [J] . 李宗吉 ,赵巍 . 中国预防兽医学报 . 2015,第008期
2. 细粒棘球蚴重组抗原rEgferritin诱导宿主抗感染免疫应答的初步研究 [J] . 王娅娜 ,王洁 ,王淑静 . 中国人兽共患病学报 . 2011,第010期
3. 细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究 [J] . 单骄宇 ,纪卫政 ,吐尔洪江.吐逊 . 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 . 2011,第2期
4. 细粒棘球蚴重组抗原P29诱导免疫保护作用下小鼠免疫细胞的动态变化 [J] . 刘成 ,纪红燕 ,朱明星 . 宁夏医科大学学报 . 2019,第010期
5. 高致病力禽流感H5N1亚型病毒逃避宿主细胞免疫应答的机制 [J] . HeuiSeo ,亢文华 ,郝俊峰 . 中国畜牧兽医 . 2004,第008期
6. 衣原体环二核苷酸合成酶在宿主细胞免疫应答中的作用研究 [C] . 李晶晶 ,郑丽丽 ,郭宣诚 . 2017年第二届全国特殊病原体学术会议 . 2017
7. 细粒棘球蚴重组抗原E.g14-3-3诱导宿主CD4+T细胞免疫调控机制的研究 [A] . 刘丽华 . 2012

细粒棘球蚴重组抗原14-3-3和苹果酸脱氢酶诱导宿主DC-CD4+T细胞免疫应答机制的研究

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅