小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH干预对卵巢移植后血流重建、卵巢储备及生育力的影响

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目的：随着抗癌诊疗技术的进步使癌症患者的存活率得到极大的提高，然而，抗癌导致的卵巢早衰风险成为影响从癌症中存活下来女性生活质量的主要原因。卵巢深低温冻存后移植是保存抗癌治疗青年女性尤其是女童生育力的有效方法。虽然已有30位健康婴儿来自冻存后移植的卵巢[1]，但冻存造成的卵泡损伤及其后的卵巢移植早期缺血缺氧导致的大量卵泡丢失依然是该项技术应用的瓶颈。寻找有效的抗低温损伤途径，尤其是从冻存环节起始进行有效的干预以缩短无血管吻合移植卵巢的血流重建时间是备受关注的领域。本实验室前期工作显示，在卵巢玻璃化冻融过程中给予低剂量的FSH干预，可提高卵巢VEFG及其受体的表达，降低损伤及凋亡卵泡的数量。这样的结果究竟对冻融卵巢移植后的血流重建有无帮助？FSH干预下的冻融方法对移植卵巢的生育力影响究竟有何效果？鉴于VEGF是强有力的血管内皮细胞分裂因子，在血管生成中期关键的作用，因此我们推测，玻璃化冻融过程中FSH上调的VEGF及其受体有助于移植卵巢的血流贯通、增加卵巢的储备、提高移植卵巢的生育力。为了验证我们的假说，本文对小鼠卵巢玻璃化冻融中FSH干预对移植后卵巢血流重建及生育力进行了观察，希望能为提高卵巢玻璃化冻融后的移植效果提供科学依据。
　　方法：将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢分为新鲜对照组（FCG）、玻璃化冻存对照组（VCG），0.3IU·mL-1FSH干预玻璃化冻存组（FSH-VG），以本实验室自主创新的EG5.5/30玻璃化液冻存完整卵巢。解冻后采用半卵巢异体肾被膜下移植技术，①于移植48小时通过卵巢形态学观察、荧光血管灌注、EDU检测细胞增殖情况、CD34及PCNA免疫组织化学及western-blot方法观察并分析血流重建的相关因素。②于移植6个月时，检测血清E2、FSH和AMH激素水平；石蜡切片HE染色，计算各组移植卵巢各阶段卵泡百分比；③采用完整卵巢原位移植技术，检测动情周期恢复所需时间；通过本交实验，观察比较移植后各组首窝产仔所需时间、移植3、6、12个月各组总产仔数及3个月内的窝产仔数。
　　结果：①FSH干预对小鼠玻璃化冻融移植卵巢血流重建的影响：FSH移植48小时，与VCG比较，FSH-VG血流灌注较广，且达到卵巢近中央部；正常卵泡百分比FSH-VG组明显高于VCG组（P<0.01），增殖细胞主要为卵巢间质细胞。CD34、PCNA蛋白表达高于VCG。②FSH干预对小鼠玻璃化冻融移植卵巢生殖内分泌的影响：冻融后半卵巢异体异位移植6个月时，虽然玻璃化冻存组闭锁卵泡数均高于FCG组，但FSH-VG组闭锁卵泡数明显低于VCG组（P<0.05），与FCG组相比，FSH-VG组的E2值略低，但无显著性差异，但却明显高于VCG组（P<0.05）。③FSH干预下的玻璃化冻融卵巢原位移植后生育力：动情周期恢复所需时间FCG、FSH-VG及VCG组分别为8.56±1.33天、9.44±1.94天和12.14±1.06，非干预组所需时间明显长于FCG和FSH-VG组（P<0.05）。FSH-VG及VCG组均低于FCG组。FCG、FSH-VG及VCG组于移植3、6、12个月内的总产仔数分别为32只/8只/11只、93只/58只/30只和113只/76只/35只；移植后3、6及12个月内的平均窝产仔数分别为5.33±1.03只/窝、4.00只/窝和3.67±0.33只/窝，5.81±1.28只/窝、5.27±1.10只/窝和3.75±0.71只/窝。移植6个月内的窝产子间隔时间分别为43.58±8.48天、40.50±7.27天和53.40±11.89天，移植12个月内47.25±10.97天、42.00±9.507天和54.5±10.97天。显示移植后FSH-VG组产子数逐渐多于VCG组，而在12个月时明显高于VCG组（P<0.05），半年至1年内的产仔间隔时间FSH-VG组明显短于VCG组（P<0.05）。
　　结论：①玻璃化冻融过程中的FSH干预可加速小鼠卵巢冻融后移植的血流重建，其机制与CD34和PCNA表达上调有关。②玻璃化冻融过程中的FSH干预可提高卵巢雌激素合成能力；③玻璃化冻融过程中的FSH干预可提高移植后卵巢的生育力。

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作者
吴昊;
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作者单位

宁夏医科大学;

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授予单位宁夏医科大学;
学科人体解剖与组织胚胎学
授予学位硕士
导师姓名王燕蓉;
年度 2014
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R339.22;
关键词
卵巢移植; 玻璃化冻存; 卵泡刺激素; 生育力;

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