转PHYA2基因玉米对根际土壤微生物及根际土壤活性成分影响的研究

声明

符号说明

摘要

1 前言

1．1 磷、植酸、植酸酶和植酸酶玉米

1．1．1 磷的作用及背景介绍

1．1．2 植酸

1．1．3 植酸酶

1．1．4 转植酸酶玉米

1．2 转基因玉米的安全性

1．2．1 转基因植物的食品安全性

1．2．2 转基因植物的环境安全性

1．3 选题根据及研究意义

2 材料和方法

2．1 材料与试剂

2．1．1 供试玉米品种

2．1．2 供试土壤

2．1．3 主要试剂

2．1．4 主要工具酶及分子试剂

2．1．5 菌株与质粒

2．1．6 引物

2．2 主要仪器及设备

2．3 实验方法

2．3．1 土壤氮磷钾含量的测定

2．3．2 生育期根际土壤中蛋白质的提取和测定

2．3．3 利用酶联免疫法测定土壤蛋白提取液中植酸酶蛋白的含量

2．3．4 三玉米品种的根际土壤微生物群落功能多样性比较

2．3．5 转植酸酶玉米外源基因水平转移检测

2．3．6 大肠杆菌E．coli质粒的提取

2．3．7 大肠杆菌E．coli感受态的热激转化

2．3．8 阳性转化子的筛选

2．3．9 转植酸酶玉米10TPY005基因组的超声波处理

2．3．10 Acinetobacter baylyi ADP1感受态细胞的制备

2．4 不同DNA片段对不动杆菌Acinetobacter baylyi ADP1感受态细胞转化效率测定

3 结果与分析

3．1 不同生育期及秸秆还田期根际土壤中氮磷钾含量的测定结果

3．1．1 不同生育期三种玉米根际土壤中氮含量的测定及分析

3．1．2 不同生育期三种玉米根际土壤中磷含量的测定及分析

3．1．3 不同生育期三种玉米根际土壤中钾含量的测定及分析

3．1．4 秸秆还田期三种玉米的根际土壤中氮含量的测定结及分析

3．1．5 秸秆还田期三种玉米的根际土壤中磷含量的测定及分析

3．1．6 秸秆还田期三种玉米的根际土壤中钾含量的测定及分析

3．2 生育期根际土壤总蛋白质的提取和测定

3．2．1 BCA法测定土壤蛋白含量的标准曲线

3．2．2 生育期根际土壤中蛋白质含量的测定

3．3 三玉米品种的根际土壤微生物群落功能多样性比较

3．3．1 根际土壤微生物群落平均颜色变化率(AWCD)的动态变化

3．3．2 生育期各品种的土壤微生物群落代谢功能多样性指数的变化

3．3．3 生育期三种玉米根际土壤微生物对不同种类碳源的利用情况

3．4 转植酸酶基因玉米外源基因水平转移检测

3．4．1 不动杆菌Acinetobacter baylyi ADP1生长曲线的测定

3．4．2 pMD-Kan质粒的构建

3．4．3同源重组检测质粒pMD-SD的构建和检测

3．4．4 pMD-SK质粒的构建

3．4．5 pMD-PhyA2质粒的构建

3．4．6 检测质粒pMD-PhyA2-Kan的构建

3．4．7 转植酸酶玉米10TPY005基因组的超声波处理

3．5 不同DNA片段对不动杆菌Acinetobacter baylyi ADP1感受态细胞转化效率测定

4 讨论

4．1 土壤中氮磷钾含量的测定

4．2 土壤中根际土壤蛋白含量和植酸酶蛋白含量的测定

4．3 利用Biolog法研究土壤中微生物群落功能多样性

4．4 转植酸酶玉米的外源植酸酶基因水平转移试验

5 结论

参考文献

致谢