棉花GhWRKY17转录因子参与ABA信号途径及干旱、高盐胁迫反应

声明

符号说明

摘要

1 前言

1．1 WRKY转录因子的发现、起源与进化

1．2 WRKY转录因子的结构特点

1．3 WRKY转录因子的分类

1．4 WRKY转录因子与W-box结合

1．5 WRKY转录因子的表达特点

1．6 WRKY转录因子的多样化功能

1．6．1 WRKY调控植物抗病防卫反应

1．6．2 WRKY调控植物的非生物胁迫应答反应

1．6．3 WRKY在植物生长发育和物质代谢过程中的作用

1．6．4 WRKY调控植物衰老过程

1．7 WRKY转录因子调控植物逆境反应的机理

1．8 本实验的目的意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 菌株与质粒

2．1．3 酶与各种生化试剂

2．1．4 PCR引物

2．2 实验方法

2．2．1 植物材料的培养与处理

2．2．2 利用TRIzol试剂盒提取RNA

2．2．3 RNA中基因组DNA的去除

2．2．4 甲醛变性凝胶进行RNA电泳

2．2．5 cDNA第一链的合成

2．2．6 cDNA纯化和加尾反应(用于5’RACE)

2．2．7 GhWRKY17全长cDNA序列的获得

2．2．8 电泳目的片段的回收

2．2．9 目的片段与克隆载体的连接

2．2．10 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化

2．2．11 试剂盒微量提取大肠杆菌质粒DNA

2．2．12 重组质粒的酶切鉴定

2．2．13 DNA序列测定

2．2．14 植物基因组DNA的提取

2．2．15 GhWRKY17全长基因组序列的获得

2．2．16 实时荧光定量PCR分析GhWRKY17的拷贝数

2．2．17 GhWRKY17启动子序列的获得

2．2．18 半定量RT-PCR分析GhWRKY17的表达

2．2．19 基因枪基因瞬时表达

2．2．20 酵母单杂交

2．2．21 农杆菌介导的瞬时表达系统

2．2．22 GhWRKY17超表达植株的获得

2．2．23 转基因植株的鉴定

2．2．24 组织化学染色分析

2．2．25 网络资源及数据库

2．2．26 生物学软件

3 结果与分析

3．1 棉花GhWRKY17基因的分离

3．1．1 GhWRKY17中间片段的分离

3．1．2 GhWRKY17 5’非编码区的分离

3．1．3 GhWRKY17 3’非编码区的分离

3．1．4 GhWRKY17全长cDNA的克隆

3．1．5 GhWRKY17全长cDNA序列分析

3．1．6 GhWRKY17编码的蛋白质序列分析及其进化分析

3．2 GhWRKY17基因组序列的克隆及分析

3．2．1 GhWRKY17全长基因组的分离及序列分析

3．2．2 GhWRKY17的拷贝数分析

3．3 GhWRKY17启动子序列的分离及顺式作用元件的预测

3．4 GhWRKY17的表达模式分析

3．4．1 GhWRKY17的组织特异性分析

3．4．2 GhWRKY17在非生物胁迫下的表达特性分析

3．4．3 GhWRKY17在信号分子诱导下的表达特性分析

3．5 GhWRKY17的转录因子特性分析

3．5．1 GhWRKY17的亚细胞定位

3．5．2 GhWRKY17与W-box特异性结合

3．6 GhWRKY17参与调节植物的干旱与高盐胁迫反应及其分子机理

3．6．1 GhWRKY17超表达植株的获得

3．6．2 超表达GhWRKY17使转基因植株对ABA敏感

3．6．3 GhWRKY17超表达植株在种子萌发期对干旱、高盐敏感

3．6．4 超表达植株在种子萌发后的生长对干旱、高盐敏感

3．6．5 GhWRKY17调节转基因植株对干旱、高盐胁迫的应答与ABA有关

3．6．6 超表达GhWRKY17在成苗期对干旱、高盐胁迫敏感

3．6．7 GhWRKY17转基因植株积累了较多的ROS从而加重了氧化损伤

3．6．8 超表达GhWRKY17降低了转基因植物的抗氧化酶活性

3．6．9 GhWRKY17转基因植株对氧化胁迫敏感

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况

项目支持