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小鼠颅内感染模型中agr系统对金黄色葡萄球菌毒力调控作用的研究

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前言

材料和方法

1.细胞细菌的准备

2.主要工具酶及试剂配制

3.主要仪器

4. 实验动物及分组

5. 颅内感染模型的制作

6. 小鼠肛温的测量

7. 脑组织病理学检测

8. 小鼠外周血血细胞分析

9. pOS1-hla-flag构建

10.全血杀伤实验:

11.CCK-8法检测细菌外分泌蛋白毒力:

12. 统计学方法

结果

1.小鼠颅内感染模型的建立

2. agr系统在小鼠颅内感染模型中作用的检测

3.?溶血素对金葡菌毒力的影响

讨论

结论

参考文献

文献综述

综述参考文献

致谢

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摘要

目的:建立由金黄色葡萄球菌引起的小鼠颅内感染模型。研究小鼠颅内感染模型中agr系统对金黄色葡萄球菌毒力的调控作用。
  方法:选取6-8周龄雌性C57BL/6J小鼠作为本研究的实验对象,通过颅内定点注射金黄色葡萄球菌菌液的方法建立小鼠颅内感染模型,对照组小鼠注射等量的生理盐水。造模成功后,观察小鼠的症状,观察最早出现死亡的时间点及48h存活率。检测肛温、外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比。取脑组织做病理切片,观察脑组织病理学改变。应用agr系统缺失的金葡菌菌株造模,观察不同菌株对小鼠致死性的差别。同时,在agr系统缺失的金葡菌菌株中回复表达了a溶血素,并检测a溶血素在小鼠颅内感染模型的作用。全血杀伤实验检测金葡菌对全血的敏感性。
  结果:模型组小鼠出现反应迟钝、抽搐等症状,12h开始出现死亡,48h生存率为26.9%,中性粒细胞百分比明显增高,脑组织病理学显示感染处大量中性粒细胞浸润。对照组均未见上述症状和死亡,脑组织病理学检查正常。进一步的实验结果显示,由agr系统缺失的金葡菌引起的颅内感染,小鼠死亡率明显降低。此外,还发现agr系统中调控分子RNAⅢ在颅内感染进程中至关重要。在agr系统缺失的金葡菌中回复表达了a溶血素之后,能部分恢复其致死性。
  结论:本文建立的小鼠金黄色葡萄球菌颅内感染模型特征稳定,可用于临床金葡菌颅内感染致病机制的研究。在小鼠颅内感染模型中,agr系统对金葡菌的毒力调控具有重要作用。

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