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活性调节细胞骨架蛋白siRNA慢病毒表达载体对杏仁核点燃大鼠学习记忆的影响

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目的:研究慢病毒介导的活性调节细胞骨架蛋白(Arc)siRNA对杏仁核电点燃大鼠学习记忆功能的影响,探讨Arc在癫痫伴发认知功能障碍中的作用。
　　方法:雄性SD大鼠60只,麻醉后左侧杏仁核基底外侧核(前囟后2.8mm;左侧旁开4.9mm;硬膜下8.6mm)植入刺激电极,右侧背侧海马(前囟后3.6mm;右侧旁开2.2mm;硬膜下2.5mm)植入注射套管。电刺激大鼠左侧杏仁核基底外侧核构建点燃模型,点燃成功后,随机分为三组:载体注射组(n=20)、空载体注射组(n=20)、单纯点燃组(n=20)。将成功构建的ArcsiRNA慢病毒表达载体、慢病毒空载体以及生理盐水分别注射到上述三组大鼠的右侧背侧海马。两周后行避暗实验观察各组大鼠第一次进入暗箱的潜伏期和明暗箱之间的穿梭次数,以检测大鼠的记忆保持能力;Morris水迷宫实验观察各组大鼠的逃避潜伏期以及平台象限穿越次数和留滞时间,以检测大鼠的空间学习和记忆能力。行为学实验结束后第二天电刺激大鼠之后,提取右侧慢病毒注射部位的海马组织,采用荧光定量PCR、Western-blot技术检测各组大鼠海马ArcmRNA以及蛋白的表达情况。实验数据均用sx±表示,采用完全随机设计的方差分析,两两比较采用Dunnett-t检验,数据使用SPSS17.0统计软件包,以P<0.05表示差异有统计学意义。
　　结果:
　　1.避暗实验:载体注射组、空载体注射组以及单纯点燃组大鼠穿梭次数分别为:11.50±1.080、3.70±1.494、3.80±1.317,进入暗箱的潜伏期分别为:15.40±8.058、94.00±10.934、99.50±10.628。三组比较差异有统计学显著性(P<0.05)。载体注射组与其它两组比较,穿梭次数增加、进入暗箱的潜伏期缩短,差异有统计学显著性(P<0.05)。
　　2.morris水迷宫:在五天的定位航行实验中,三组大鼠的逃避潜伏期第1、2d比较差异无统计学意义(P>0.05),第3、4、5d三组比较差异均有统计学显著性(P<0.05),载体注射组与其它两组比较,逃避潜伏期时间长,差异均有统计学显著性(P<0.05)。单纯点燃组与空载体注射组比较,差异无统计学显著性(P>0.05)。随着实验天数的增加,各组逃避潜伏期都呈现出逐渐缩短的趋势,但是载体注射组与其它两组相比,缩短的趋势不明显(P>0.05)。在空间搜索实验中,三组大鼠平台象限的穿梭次数和留滞时间比较,差异有统计学显著性(P<0.05),载体注射组与其它两组比较,平台象限穿梭次数以及留滞时间明显减少,差异有统计学显著性(P<0.05)。
　　3.荧光定量PCR:载体注射组、空载体注射组以及单纯点燃组大鼠背侧海马ArcmRNA相对表达量分别为:5.80±0.06、13.55±0.42、15.82±0.51,三组比较差异有统计学显著性(P<0.05)。载体注射组与其它两组比较,ArcmRNA表达明显下降(P<0.05)。
　　4.Western-blot:载体注射组、空载体注射组以及单纯点燃组大鼠背侧海马Arc蛋白相对含量分别为:0.108±0.007、0.416±0.029、0.418±0.016,三组比较,差异有统计学显著性(P<0.05)。载体注射组与其它两组比较,Arc蛋白表达明显下降(P<0.05)。
　　结论:Arc表达下降,严重影响杏仁核点燃大鼠记忆保持能力及空间学习、记忆功能,Arc在杏仁核点燃大鼠学习记忆功能中起重要作用。

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