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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因及几丁质酶基因转化欧美杨的研究

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英文缩略表

1引言

1.1杨树的组织培养

1.1.1组织培养在杨树上的应用

1.1.2杨树组织培养技术

1.2杨树基因工程育种

1.2.1外源基因转化技术

1.2.2基因工程在杨树中的应用

1.3植物蛋白酶抑制剂研究进展

1.3.1植物蛋白酶抑制剂的作用与分类

1.3.2植物蛋白酶抑制剂在基因工程中的应用

1.4几丁质酶研究进展

1.4.1植物几丁质酶的特性

1.4.2几丁质酶与植物的防卫反应机制

1.4.3植物转几丁质酶基因工程的研究

1.5选题依据

1.5.1转化基因的选择

1.5.2植物受体的选择

1.5.3基因转化方法的选择

2材料与方法

2.1材料

2.1.1植物材料

2.1.2昆虫材料

2.1.3菌株与质粒

2.1.4细菌培养基

2.1.5植物激素和植物培养基

2.1.6试剂

2.1.7酶与生化试剂

2.1.8 PCR引物

2.1.9仪器

2.2实验方法

2.2.1欧美107杨高频再生体系的建立

2.2.2农杆菌介导法转基因

2.2.3抗生素筛选

2.2.4转化植株的分子检测

2.2.5 GUS基因稳定表达的组织化学染色

2.2.6抗虫生物活性测试

3结果与分析

3.1欧美107杨高频再生体系的建立

3.1.1最佳激素培养体系的确立

3.1.2其他理化因素的影响

3.1.3玻璃化问题的解决

3.1.4苗龄对107杨生长和分化的影响

3.2农杆菌介导的遗传转化体系的初步建立

3.2.1转CpTI基因抗虫植株的获得

3.2.2几丁质酶基因的转化

4.讨论

4.1欧美107杨基因转化受体系统的建立

4.2多价基因的转化

4.3单基因的多功能

4.4下一步工作设想

5.结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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摘要

杨树是世界主要的造林和经济树种之一,在世界各地特别是中国均有广泛的栽培。欧美107杨是从欧洲黑杨与美洲黑杨的杂交后代中选育出的一个无性系,具有抗逆能力强、材质好和速生等优点,它既可作为绿化树种,又可作为优质的纸浆原料,在工业用材中发挥重要作用,为目前推广的主要品系之一。几丁质酶可以将几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖,大量研究表明,几丁质酶在植物体内和体外,对病原真菌的生长均有明显的抑制作用。豇豆胰蛋白酶抑制剂能抑制昆虫肠道蛋白酶活性,使昆虫生长发育缓慢,甚至死亡,具有广谱的抗虫作用。本研究选择欧美107杨作为转基因的实验材料,研究了激素浓度等因素对其叶片的芽再生、继代、生根等方面的影响,建立了杨树高频再生体系。在此基础上,将编码豇豆胰蛋白酶抑制剂和几丁质酶的基因分别构建植物表达载体,以欧美107杨叶片为外植体,利用改良的农杆菌介导法进行转化,获得转基因植株。

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