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环境雌激素西玛津和阿特拉津对青鳉鱼发育影响的分子毒理学研究

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第一章 前言

第二章实验材料和方法

第3章西玛津和阿特拉津的分子毒理学研究

参考文献

附录 攻读硕士学位期间的主要成果(2004-2006)

致谢

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摘要

普遍存在于环境中的内分泌干扰物质(EDCs)三嗪除草剂西玛津和阿特拉津已经对人类和野生生物造成了巨大的危害。这些物质通过模拟或拮抗机体内在的天然激素,影响生物体正常的性别分化和性腺发育。最近几年来,从分子水平上揭示这两种物质作用信号途径的研究已经有越来越多的报道。但是对于危害现象的分子毒理机制的报道相对较少。为此,本文以完整生命周期的青鳉鱼为实验动物,从基因表达角度,对西玛滓和阿特拉津导致鱼类性腺发育延迟和雌雄同体现象的原因进行了研究,对西玛津和阿特拉津影响性别分化的分子毒理学机制进行了探索。 本研究运用实验室已改进的Trizol试剂提取方法,提取青鳉鱼性腺和肝脏的总RNA,同时,使用实时定量RT-PCR方法对实验室运用生物信息学技术与分子生物学技术相结合的方法克隆和分析出的青鳉鱼中的一些重要的性别分化相关基因,如GATA4、CYP19B、STAR、WNT4等进行定量分析测定;以实验室开发的RPL-7基因作为基因表达内参照对以上基因表达量进行处理分析比较。 本文从组织水平上研究了西玛津和阿特拉津对性腺发育的影响,从基因表达角度试图阐释了这些影响发生的毒理机制。研究表明,西玛津和阿特拉津等环境雌激素均不同程度的导致青鳉鱼精巢发育延迟,甚至出现雄鱼表型逆转,导致性腺雌雄同体;在这一过程中,除VTG-I这一常见标记物基因表达增加外,ER-α基因也显著表达,ER-α的增加则可能使机体结合雌激素的能力增强,从而加速了雌性化过程。同时,西玛津和阿特拉津使雄性青鳉鱼性腺发育相关基因STAR、CYP19B、WNT4、GATA4的表达量虽然产生了变化,但显著性较差。 这些相关基因表达的研究,对进一步探索西玛津和阿特拉津的分子毒理学机理和进一步寻找新的分子生物标记物奠定了基础。

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