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不同留针时间的针刺诱导对新生儿鼠缺血缺氧性脑损伤脑内源性神经干细胞的影响

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目录

提要

Abstract

引言

文献综述

一、近五年针灸治疗小儿脑性瘫痪的进展

(一) 穴位注射

(二) 头针

(三) 以体针为主的综合治疗

(四) 理疗与针刺结合治疗

(五) 配合其他特殊治疗方法

(六) 结论

二、任脉、督脉与脑的关系

(一) 任脉、督脉的生理特点

(二) 任脉与督脉循行与脑密切相关

(三) 小儿脑性瘫痪的中医病因病机

(四) 任、督二脉对临床针刺治疗小儿脑瘫的启示

三、祖国针灸学对留针的认识

四、留针时间的现代研究

(一) 留针的临床研究

(二) 留针的动物实验研究

(三) 问题和展望

五、针刺诱导对脑内源性神经干细胞影响的研究进展

(一) 选择的经脉、腧穴和针刺方法

(二) 选择的实验动物模型

(三) 针刺诱导对内源性神经干细胞的影响

(四) 讨论

六、缺血缺氧性脑损伤动物模型的研究进展

(一) 模型动物的选择

(二) 模型动物的诱导方法

(三) 胎儿发育迟缓

(四) 问题与展望

实验研究

一、材料与方法

(一) 材料

(二) HIE模型建立 采用改良的HIE建模方法

(三) 针刺方法

(四) 神经功能缺损评分

(五) 动物排除标准

(六) BrdU给药

(七) 取材与切片

(八) 苏木素—伊红染色(HE染色)

(九) 免疫组织化学法检测

二、结果

(一) 速刺、留针对HIE大鼠神经功能缺损评分的影响

(二) 速刺和留针对HIE大鼠脑组织形态结构的影响(见附图20-23,X200)

(三) 速刺和留针对HIE模型大鼠脑组织BrdU蛋白表达的影响

(四) 速刺和留针对HIE模型大鼠脑组织Nestin蛋白表达的影响

讨论

一、缺血缺氧对NSCs增殖、分化的影响

二、针刺对NSCs增殖、分化的影响

三、不同留针时间对NSCs增殖、分化的影响

结论

参考文献

附录

缩略语表

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致谢

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摘要

目的:为了规范针灸治疗,客观、科学地评定疗效,拟利用中医基础理论,结合现代医学的研究方法,利用缺血缺氧脑损伤的新生动物模型、利用分子生物学、免疫学技术观察不同针刺时间下的大脑神经干细胞的增殖、分化情况,探讨针刺治疗新生儿缺血缺氧脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的机制,明确针刺治疗本病的最佳的时效。为针刺治疗HIE提供科学、扎实的理论依据,为HIE的综合治疗寻找更适合小儿特点的安全、实用的有效方法。
  材料与方法:健康新生7天SD大鼠雌雄不拘,体重12g-14g,,随机分为正常(空白)对照组24只、模型组24只、快速刺不留针组(速刺)24只、留针30min组24只,后三组结扎左侧颈总动脉并缺氧2小时制作新生儿鼠缺血缺氧性脑病模型。每组又分为3天组、7天组、14天组和28天组,分别于术后第3天、第7天、第14天和第28天进行取材;四组同时于各观察点取材。四组的喂养条件相同。针刺方法:选任脉、督脉穴位,分别给与快速刺不留针、留针30min,每天一次。正常对照组和模型对照组不做针刺处理。各组动物取材前2小时腹腔注射Brdu(5—溴脱氧尿嘧啶核苷)用于标记脑内神经干细胞增殖情况。分别于模型建立后3d、7d、14d和28d后,运用神经功能缺损评分和HE染色观察动物的神经功能症状与脑损伤病理改变;免疫组化观察大鼠缺血缺氧侧海马齿状回(DG)、室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),巢蛋白(Nestin)的改变,检测脑缺血缺氧后神经干细胞的数量及其增殖,从而评价速刺、留针对脑缺血缺氧损伤后神经干细胞的影响作用。
  结果:1、速刺、留针对HIE大鼠神经功能缺损评分的影响:经Kruskal-Walhs检验(正常对照组不计其中),各个手术组大鼠术后28天的神经功能症状较第1天明显减轻(P<0.01)。在各组之间的两两比较中,速刺组和留针组大鼠的神经功能症状在术后14、17、21、28天比模型组明显减轻,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。2、速刺和留针对HIE大鼠脑组织形态结构的影响:模型对照组:左脑海马可见局灶状坏死,坏死区域胞核缩小呈凝固状,坏死灶周围正常组织结构层次清晰;左脑枕叶皮层可见大片组织结构模糊的坏死区域;速刺治疗组:大部分脑神经细胞变性,少量脑神经细胞变性坏死;留针治疗组:大部分脑神经细胞尚好,少量脑神经细胞变性坏死,3、速刺和留针对HIE模型大鼠脑组织BrdU蛋白表达的影响:与正常对照组比较,模型对照组大鼠大脑DG和SVZ区BrdU蛋白的表达显著增加(P<0.01);速刺和留针均可使BrdU蛋白的表达上调。与模型对照组比较,速刺治疗组和留针治疗组BrdU蛋白的表达增加(P<0.01),具有统计学意义。速刺治疗组和留针治疗组比较,术后3d、7d时BrdU蛋白的表达无显著差异(P>0.05),术后14d、28dBrdU蛋白的表达具有显著性差异(P<0.05),留针治疗组表达高于速刺治疗组。4、速刺和留针对HIE模型大鼠脑组织Nestin蛋白表达的影响:与正常对照组相比较,模型对照组大鼠大脑DG和SVZ区Nestin蛋白的表达显著增加(P<0.01);与模型对照组比较,速刺治疗组和留针治疗组Nestin蛋白的表达增加(P<0.01),具有统计学意义。速刺治疗组和留针治疗组比较,术后3d、7d时Nestin蛋白的表达无显著差异(P>0.05),术后14d.28dNestin蛋白的表达具有显著性差异(P<0.05),留针治疗组表达高于速刺治疗组。
  结论:1、速刺和留针刺能够促进HIE大鼠肢体功能康复,神经功能缺损评分有明显改善。2、速刺和留针刺能使HIE大鼠DG区和SVZ区BrdU阳性胞增殖更明显,表明速刺和留针刺使这两个区域增殖活性增加。3、速刺和留针刺能使HIE大鼠DG区和SVZ区Nestin阳性胞增殖更明显,表明速刺和留针刺促进神经干细胞的增殖。4、速刺和留针刺对HIE大鼠DG区和SVz区神经干细胞的影响早期无差别;第14d及第28d时留针刺组优于速刺组。5、本实验结果显示,速刺和留针刺能促进脑缺血缺氧后神经干细胞的增殖、分化,促进神经细胞修复,减轻功能缺损程度,这可能是针灸治疗HIE的重要作用机制之一。

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